油菜染色體加倍及倍性鑒定方法研究.pdf

1、本研究以甘藍(lán)型油菜純合品系(中雙11、F009)、甘藍(lán)型油菜雜交F1代(3828×0009、0009×3828)、甘藍(lán)型油菜和白菜型油菜雜交F1代(0470×3383、0009×3383)為誘導(dǎo)加倍材料，以秋水仙素為主要化學(xué)誘導(dǎo)加倍試劑，使用植物組織培養(yǎng)和化學(xué)試劑誘導(dǎo)相結(jié)合的方法誘導(dǎo)上述材料染色體加倍;通過傳統(tǒng)根尖細(xì)胞壓片觀察、形態(tài)學(xué)觀察和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)等方法，對(duì)加倍處理材料進(jìn)行倍性鑒定比較，并對(duì)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)油菜染色體倍性方法進(jìn)行深入

2、研究。其主要結(jié)果如下:
　　1.設(shè)置0mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L五個(gè)濃度水平的秋水仙素梯度，在MS培養(yǎng)基上對(duì)受體材料種子進(jìn)行加倍處理，記錄并計(jì)算種子發(fā)芽率，存活率，加倍成功率，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)材料隨秋水仙素濃度的增高，種子發(fā)芽率和幼苗存活率逐漸降低，而加倍成功率逐漸上升;確定濃度60mg/L為油菜種子在培養(yǎng)基上的加倍最適濃度。
　　2.本實(shí)驗(yàn)中采用純合甘藍(lán)型油菜、雜交甘藍(lán)型油菜、甘白種間雜

3、交油菜三大類材料，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，其中甘白種間雜交油菜對(duì)秋水仙素的耐受能力最強(qiáng)，有最高的發(fā)芽率、存活率和加倍成功率，是最適用于加倍的材料。
　　3.采用傳統(tǒng)根尖壓片計(jì)數(shù)染色體條數(shù)方法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)法檢測(cè)加倍處理材料染色體倍性，以根尖壓片計(jì)數(shù)染色體方法為參考，確定流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)油菜倍性的可靠性，并檢測(cè)出三倍體甘白雜交油菜F1代成功加倍得到的六倍體油菜和四倍體雜交甘藍(lán)型油菜F1代成功加倍得到的八倍體油菜。通過研究流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)油菜染色

4、體方法，探索出了一套適用于油菜倍性檢測(cè)的技術(shù)體系:檢測(cè)所需最佳試劑配方:MOPS20 mmol/L，檸檬酸鈉30mmol/L，MgCl245 mmol/L，TritonⅩ-1000.2％(V/V)，β-巰基乙醇20ul/ml;檢測(cè)樣本最佳用量0.1g; DNA特異性染色液使用體積最佳為400ul、濃度最佳為100ug/ml、染色時(shí)間最佳為30min。
　　4.通過對(duì)加倍后代植株的形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，加倍成功植株表現(xiàn)為莖稈變粗壯，植株矮化