γ輻射損傷小鼠基因組表達譜分析及sirt1基因反義寡核苷酸的輻射增敏作用研究.pdf

1、本文運用基因芯片技術(shù)和表達譜分析的方法在基因表達層次上對輻射損傷現(xiàn)象作出了新的描述和分析，發(fā)現(xiàn)了新的輻射相關(guān)基因，提出sirtl基因可能參與輻射損傷應(yīng)急調(diào)控，最后用反義寡核苷酸技術(shù)初步驗證了sirtl反義寡核苷酸對A549細胞有輻射增敏作用，并對多種癌細胞系增殖有抑制作用。 第一部分為小鼠基因組芯片實驗及表達譜數(shù)據(jù)分析。實驗選取小鼠股骨骨髓為實驗材料，用小鼠基因組芯片檢測了6．5Gyγ射線輻照前和輻照后6小時、l周和2周的基因表

2、達情況，通過芯片掃描和軟件分析得出每個基因在4個時間點的表達譜。通過統(tǒng)計學(xué)分析和倍數(shù)變化分析篩選出差異表達基因，并用互聯(lián)網(wǎng)上的生物信息數(shù)據(jù)庫對差異基因作了生物學(xué)注釋和通路分析。使用了層次聚類、K-Medoid聚類、交集分析和GeneOntology術(shù)語顯著性分析的方法篩選了部分輻射相關(guān)基因，配合文獻數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)提出了以sirtl基因為代表的與Y輻射損傷可能相關(guān)的基因，同時我們推測y射線輻射后sirtl表達下調(diào)會提高p53的活性。

3、 第二部分選取sirtl基因為研究對象，首先以本室專利的方法預(yù)測了10個反義靶點，用RT-PCR和WesternBlot方法篩選了針對該基因的有效且特異的反義寡核苷酸序列；然后應(yīng)用MTS、流式細胞術(shù)和WesternBlot等方法，研究了該反義寡核苷酸序列在A549細胞系中的Y輻射增敏以及抗腫瘤領(lǐng)域內(nèi)的作用。。WesternBlot實驗證明，sirtl基因在Y輻射后表達下調(diào)可能與p53的乙?；缴哂嘘P(guān)，提高的p53活性有利于其在輻射引