組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶與轉(zhuǎn)化生長因子β1在幼鼠腎間質(zhì)損傷中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景： 腎小管間質(zhì)纖維化幾乎是所有慢性腎臟疾病進(jìn)行性發(fā)展的共同通路，是導(dǎo)致慢性腎功能衰竭的病理學(xué)基礎(chǔ)或病理學(xué)特征。因此探討促發(fā)腎小管間質(zhì)纖維化的因素和相關(guān)機(jī)制，尋求其早期可逆因子或防治措施對腎臟疾病轉(zhuǎn)歸有重要意義。很多實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)轉(zhuǎn)化生長因子—β1(TGF—β1)是眾多致纖維化細(xì)胞因子中作用最為強(qiáng)烈的誘導(dǎo)因子，在腎間質(zhì)纖維化的過程中起重要作用。近來TGF—β1的另一功能被發(fā)現(xiàn)，就是可以調(diào)節(jié)另一重要的細(xì)胞外基質(zhì)調(diào)節(jié)酶：組織型轉(zhuǎn)

2、谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase，tTG)。tTG是一種Ca2+依賴的具有轉(zhuǎn)酰胺基作用的酶，它可以催化蛋白分子內(nèi)和/或蛋白分子間形成難降解的ε—(γ—谷氨?；?賴氨酸肽鍵使細(xì)胞外基質(zhì)蛋白交聯(lián)而過度沉積。研究發(fā)現(xiàn)組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶在腎間質(zhì)纖維化過程中也發(fā)揮著作用。 目的： 探討單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型(UUO)幼年大鼠腎間質(zhì)纖維化過程中tTG與TGF—β1組織定位表達(dá)的趨勢、相關(guān)性及潛在的病理意義，以

3、及用苯那普利和氯沙坦聯(lián)合干預(yù)的效應(yīng)。 研究對象和方法： (1)采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)的方法制備實(shí)驗(yàn)性梗阻性腎小管間質(zhì)損傷模型；3-4周齡幼年雄性Wistar大鼠96只，分為正常對照組(32只)、模型組(32只)、模型干預(yù)組(32只)，于實(shí)驗(yàn)第3、7、14、28天每組各取8只大鼠，取病變腎臟石蠟包埋并切片；(2)HE染色觀察腎小管萎縮擴(kuò)張、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤情況。(3)Masson染色評價(jià)腎組織常規(guī)病理變化；(4)免疫

4、組化方法檢測大鼠腎組織tTG、TGF—β1及α—平滑肌肌動(dòng)蛋白(α—SMA)的表達(dá)，并從時(shí)相和組織定位表達(dá)趨勢上評價(jià)tTG與TGF—β1的相關(guān)性，探討tTG在腎間質(zhì)纖維化中的作用；(5)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果： (1)常規(guī)病理及Masson染色：模型組3天即可見各級腎小管擴(kuò)張，少量炎性細(xì)胞浸潤，7天腎小管明顯擴(kuò)張，間質(zhì)內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤，14天及21天時(shí)腎小管間質(zhì)的病變程度漸加重，有部分腎小管

5、萎縮、壞死，間質(zhì)細(xì)胞增生、纖維素滲出。至28天時(shí)，表現(xiàn)為嚴(yán)重的間質(zhì)纖維化，腎小管廣泛擴(kuò)張、萎縮、壞死，間質(zhì)細(xì)胞大量增生，細(xì)胞外基質(zhì)堆積，纖維素大量滲出，與對照組比各時(shí)間點(diǎn)差異均有顯著性(P＜0．01)。模型干預(yù)組病變較未治療組明顯減輕(P＜0．01)，但仍重于對照組(P＜0.01)。(2)免疫組化染色測定tTG、TGF—β1及α—SMA蛋白表達(dá)情況：①對照組中，tTG及TGF—β1主要在腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)，間質(zhì)區(qū)及腎小球幾乎無表達(dá)

6、，tTG蛋白表達(dá)在第3、7、14、28天的平均光密度值分別為0.00271±0.00117，0.00278±0.00124，0.00237±0.00100，0.00220±0.00116，TGF—β1在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)的平均光密度值分別為0.00921±0.00161，0.00867±0.00232，0.00919±0.00237，0.00850±0．00213各時(shí)間點(diǎn)差異無顯著性(P均＞0.05)；α—SMA蛋白主要表達(dá)于腎間質(zhì)血管壁，間質(zhì)

7、區(qū)僅有極微量的表達(dá)或不表達(dá)，在腎小球及腎小管上皮細(xì)胞均無表達(dá)，四個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均光密度值分別為0.00462±0.00122，0.00489±0.00145，0.00462±0.00160，0.00455±0．00184，各時(shí)間點(diǎn)差異無顯著性(P均＞0.05)；②模型組大鼠隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長，腎組織病變加重，tTG在腎小管上皮細(xì)胞部位的表達(dá)漸增加，陽性信號強(qiáng)于對照組，且在間質(zhì)中出現(xiàn)片狀表達(dá)，α—SMA廣泛分布于腎間質(zhì)區(qū)，TGF—β1蛋白表達(dá)于

8、腎間質(zhì)、纖維細(xì)胞，在實(shí)驗(yàn)第14天達(dá)到高峰，以后其表達(dá)有所下降，但仍高于對照組，tTG蛋白表達(dá)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均光密度值分別為0.00637±0.00152，0.0126±0.00197，0.0199±0.00203，0.0230±0.00224，α—SMA蛋白表達(dá)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均光密度值分別為0.0107±0.00243，0.0202±0.00253，0.0292±0.00360，0.0374±0.00348，兩種蛋白表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)比較差異

9、有顯著性，各時(shí)間點(diǎn)與對照組比差異有顯著性(P均＜0.01)：TGF—β1蛋白表達(dá)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均光密度值分別為0.0309±0.00355，0.0418±0.00533，0.0494±0.00626，0.0475±0．00452，各時(shí)間點(diǎn)與對照組比差異有顯著性(P均＜0.01)；③模型干預(yù)組三種蛋白表達(dá)的上調(diào)趨勢明顯受抑，tTG蛋白表達(dá)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均光密度值分別為0.00321±0．00108，0．00951±0.00111，0.0144

10、±0.00159，0.0192±0．00167，TGF—β1蛋白表達(dá)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均光密度值分別為0．0188±0.00211，0.0364±0.00435，0.0457±0.00435，0.0427±0.00621，α—SMA蛋白表達(dá)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均光密度值分別為0.00659±0.00145，0．0130±0.00198，0．0162±0.00190，0.0273±0．00193，三者的表達(dá)與模型組比較差異有顯著性(P均＜0．01)，但

11、各時(shí)間點(diǎn)比較其表達(dá)仍強(qiáng)于對照組(P均＜0.05)。(3)相關(guān)性分析：模型組各指標(biāo)兩兩之間的相關(guān)系數(shù)r值均大于零，呈正相關(guān)關(guān)系(P均＜0.01)。 結(jié)論： 本研究提示UUO幼鼠腎間質(zhì)纖維化過程中，腎組織內(nèi)tTG、TGF—β1及α—SMA蛋白表達(dá)增高，三者之間呈正相關(guān)關(guān)系，提示tTG參與了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展，其表達(dá)上調(diào)具有重要的致病意義。苯那普利和氯沙坦干預(yù)后明顯抑制了三者的表達(dá)，具有明顯的干預(yù)效應(yīng)，提示兩種藥物的腎保護(hù)