環(huán)境激素對魚類生殖影響生物檢測方法的建立.pdf

1、當前，環(huán)境激素的生態(tài)效應(yīng)已經(jīng)引起人類的極大關(guān)注。由于環(huán)境激素種類多樣，并且在環(huán)境中存在水平極低，為化學檢測帶來困難。因此，為了評價環(huán)境激素的污染狀況及潛在危害，生物檢測方法越來越受到人們的重視。在對環(huán)境激素的研究中，目前已經(jīng)建立檢測特異標志物--卵黃蛋白原的ELISA方法和普通RT-PCR方法。前者需要制備特異抗體，程序復(fù)雜，且相對于從分子水平進行的基因表達定量方法靈敏度仍有較大差距；而普通RT-PCR方法在基因表達定量方面也存在準確性

2、較差的缺點，不能有效地反映劑量效應(yīng)關(guān)系。本研究中通過對魚類原代肝細胞暴露E2，采用Q-RT-PCR檢測青鳉魚和梭魚VTG等基因的表達變化，期望建立較高靈敏度的環(huán)境雌激素效應(yīng)評價方法。主要取得了如下研究結(jié)果： (1)本實驗通過對青鯔魚肝臟細胞原代培養(yǎng)，建立了穩(wěn)定的毒理學實驗?zāi)Ｐ?，與傳統(tǒng)的活體暴露實驗相比，節(jié)約了實驗動物材料、實驗周期及實驗耗材。為環(huán)境激素毒理學研究奠定了基礎(chǔ)。 (2)本研究中成功建立了實時定量RT-PCR與

3、原代培養(yǎng)青鳉魚肝細胞相結(jié)合的invitro環(huán)境雌激素效應(yīng)評價方法，并且顯示出較高的靈敏度。 (3)VTG-Ⅰ、VTG-Ⅱ、CHG-H、CHG-L和ERa在體外培養(yǎng)青鳉魚肝細胞中均與雌激素暴露濃度呈現(xiàn)較好的劑量效應(yīng)關(guān)系，其中VTG-Ⅰ、VTG-Ⅱ、CHG-H、CHG-L，作為檢測雌激素的生物標記物基因可優(yōu)先選擇。 (4)本文通過擴增梭魚VTG、β-actin基因，測定基因序列，建立檢測E2暴露后梭魚肝細胞VTG表達的實時定