橙皮苷酶的制備及其催化性質(zhì)的研究.pdf

1、本文從土壤和實驗室保藏菌株中篩選得到一株橙皮苷酶高產(chǎn)菌株Aspergillus niger WZ001，通過固態(tài)發(fā)酵制備橙皮苷酶，以橙皮苷作為底物，對其酶轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行分析鑒定，得到兩種酶解產(chǎn)物，它們分別是橙皮素單糖苷和橙皮素。
　　 利用兩次硫銨沉淀、HiprepTM16/10Phenyl疏水層析、HiprepTMQ離子交換、SuperdexTMG75凝膠過濾等方法將橙皮苷酶進(jìn)行分離純化，得電泳級α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄

2、糖苷酶，α-L-鼠李糖苷酶純化倍數(shù)為24.3倍，酶活回收率為9.0％，分子量約66kDa；β-D-葡萄糖苷酶純化倍數(shù)為倍28.0倍，酶活回收率為9.9％，分子量約97kDa。由實驗結(jié)果可知橙皮苷酶是一個由α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶組成的酶系，首先由α-L-鼠李糖苷酶作用于橙皮苷，將其轉(zhuǎn)化為橙皮素單糖苷，而后由β-D葡萄糖苷酶將橙皮素單糖苷進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為橙皮素。Aspergillus nigerWZ001能夠同時產(chǎn)生兩種不同的α

3、-L-鼠李糖苷酶，一種能夠作用于橙皮苷的α-1，6-鼠李糖苷鍵，另一個可作用于柚皮苷的β-D-葡萄糖苷鍵。
　　 本文對分離純化后的α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)和反應(yīng)動力學(xué)的研究。α-L-鼠李糖苷酶的最適pH和最適溫度分別為4.0和60℃，該酶在溫度低于50℃、pH2.0-10.0的范圍內(nèi)比較穩(wěn)定，米氏常數(shù)Km=6.7mmol/L。β-D-葡萄糖苷酶的最適pH和最適溫度分別為4.0和60℃，該酶在溫度低于