柚苷酶生產(chǎn)菌株的選育及其酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、柚皮苷是柑橘類果汁中的主要苦味成分,會明顯的降低柑橘類果汁的品質(zhì)。酶法脫苦與傳統(tǒng)方法相比具有工藝簡單、反應(yīng)條件溫和、對果汁品質(zhì)無影響及環(huán)保無污染等優(yōu)勢因而是最理想的脫苦方法。本文采用透明圈法從沙田柚皮腐爛液中篩選出一株產(chǎn)柚苷酶的野生菌株,隨后采用紫外、亞硝基胍、亞硝基胍和紫外結(jié)合以及離子注入等方式對該菌株進行誘變選育,并對選育菌株所產(chǎn)柚苷酶的酶學(xué)性質(zhì)進行了研究。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)出發(fā)菌株的篩選采用透明圈法從發(fā)霉的柚

2、子皮上篩選到產(chǎn)柚苷酶能力強的菌株52株,經(jīng)搖瓶復(fù)篩后得到菌株M1,其發(fā)酵液酶活為140.8 U/mL,經(jīng)傳代驗證該菌株具有較好的遺傳穩(wěn)定性。對菌株M1進行傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分類學(xué)鑒定,初步鑒定為青霉,命名為青霉M1(Penicillium sp.M1)。
　　 (2)青霉M1(Penicillium sp.M1)的紫外、亞硝基胍及紫外和亞硝基胍復(fù)合誘變 UV誘變條件為15W紫外燈,照射處理時間5 min,獲得一株高產(chǎn)柚苷酶菌株青霉U15

3、(Penicillium sp.U15),搖瓶發(fā)酵酶活為334.3 U/mL,其產(chǎn)酶能力較出發(fā)菌株提高了137.4％。NTG誘變條件為NTG濃度800μg/mL,時間2 h,獲得一株高產(chǎn)柚苷酶菌株青霉N09(Penicillium sp.N09),搖瓶發(fā)酵酶活為380.5U/mL,其產(chǎn)酶能力較出發(fā)菌株提高了14.4％。紫外和亞硝基胍誘變條件為NTG濃度800μg/mL,UV照射時間為4 min,獲得一株高產(chǎn)柚苷酶菌株青霉UN02(Pen

4、icillium sp.UN02),搖瓶發(fā)酵酶活為448.9 U/mL其產(chǎn)酶能力較出發(fā)菌株提高了18.0％,經(jīng)傳代驗證,該菌株具有較理想的遺傳穩(wěn)定性,而且具有比較理想的產(chǎn)酶潛力,有待進一步開發(fā)。
　　 (3)N+離子注入法誘變用N+離子注入法對高產(chǎn)菌株青霉UN02(Penicillium sp.UN02)進行進一步的誘變選育,采用注入能量為15 KeV,劑量為192×1013 ions/cm2范圍附近誘變,經(jīng)過透明圈初篩和搖瓶復(fù)

5、篩得到青霉1523(Penicillium sp.1523),搖瓶發(fā)酵酶活為573.6 U/mL,其產(chǎn)酶活力出發(fā)菌株提高了27.8％,且該菌株具有較好的遺傳穩(wěn)定性,是一株比較理想的柚苷酶高產(chǎn)菌株。
　　 (4)柚苷酶酶學(xué)性質(zhì)的研究通過對青霉1523(Penicillium sp.1523)所產(chǎn)柚苷酶的酶學(xué)性質(zhì)試驗,得出最適反應(yīng)溫度為50℃,最適pH為4.0；多種金屬陽離子對該酶活性有不同的影響,Ca2+、Mg2+在濃度為2.5～