羅格列酮對(duì)哮喘患者T淋巴細(xì)胞源性IL-10影響及調(diào)節(jié)NF-κB的可能機(jī)制.pdf

1、目的 1、觀察支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘)患者外周血T淋巴細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素．10(interleukin-10，IL-10)的狀態(tài)。 2、觀察羅格列酮對(duì)哮喘患者T淋巴細(xì)胞NF-KB活性的影響及可能機(jī)制。 方法 選取哮喘患者和健康自愿對(duì)照者各10名，抽取外周靜脈血10ml用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血PBMC(peripheral blood mononuclearcells，PBMC)，制成PBMC細(xì)胞懸液，懸液

2、貼壁培養(yǎng)2小時(shí)分離純化T淋巴細(xì)胞并按如下分組：A1組(健康對(duì)照者T淋巴細(xì)胞原液組，即于含10﹪胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素、萬分之三谷氨酰胺及50μg/ml PHA的RPMI-1640培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)中培養(yǎng)；A2組(哮喘患者T淋巴細(xì)胞原液組)；A3組(哮喘患者T淋巴細(xì)胞，在A2組基礎(chǔ)上加終濃度為20 μmol/l的羅格列酮)。A4組(哮喘患者T淋巴細(xì)胞，在A2組基礎(chǔ)上加終濃度為20 μmol/l的羅格列酮及終

3、濃度為10 μg/ml的IL-10抗體)，細(xì)胞濃度均為1×10<'6>/ml。將上述分組細(xì)胞置于飽和濕度、37℃、含5﹪CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)48小時(shí)，每次培養(yǎng)的同時(shí)都用其完全培養(yǎng)基做無細(xì)胞的空白對(duì)照組。然后用ELISA法測(cè)定培養(yǎng)上清液IL-10濃度，收集細(xì)胞并用細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測(cè)T淋巴細(xì)胞內(nèi)核因子-kB(nuclear factor-kappaB，NF-kB)活化情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，測(cè)定值采用均數(shù)

4、±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示。在方差齊性基礎(chǔ)上完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的多個(gè)樣本均數(shù)比較采用F檢驗(yàn)，完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的多個(gè)樣本均數(shù)之間的兩兩比較采用最小顯著差異t檢驗(yàn)，并將哮喘T淋巴細(xì)胞之NF-KB活性與上清液IL-10濃度行直線相關(guān)分析，α=0.05，雙側(cè)P≤0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 培養(yǎng)上清液IL-10濃度：A2組上清液IL-10濃度明顯低于Al組(P<0.05)； A3組上清液IL-10濃度明顯高于A2組(P<0.05)，A1和A3

5、組比較無差別(P>0.05)；A4組上清液IL-10濃度均低于A1，A2,A3組，即A1，A3>A2>A4。 T淋巴細(xì)胞NF-KB活化率：A2組T淋巴細(xì)胞NF-kB活化率明顯高于A1組(P<0.05)；A3組T淋巴細(xì)胞NF-kB活化率明顯低于A2組(P<0.05)；A2和A4組比較無差別(P>0.05)，即A2，A4>A3>A1。 NF-kB活化率與培養(yǎng)上清液IL-10濃度的相關(guān)性：A2組T淋巴細(xì)胞NF-kB活性與A2組

6、上清液IL-10濃度成負(fù)相關(guān)(r=-0.81，P<0.01)；A3組T淋巴細(xì)胞NF-kB活性與A3組上清液IL-10濃度成負(fù)相關(guān)(r=-0.84，P<0.01)；A4組T淋巴細(xì)胞NF-kB活性與A4組上清液IL-10濃度成負(fù)相關(guān)(r=-0.82，P<0.01)。 結(jié)論 1、哮喘患者外周血T淋巴細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-10水平減低。 2、哮喘患者T淋巴細(xì)胞NF-K B活性明顯增高，可能與IL-10分泌減低有關(guān)。