哮喘患者肺部γδT淋巴細(xì)胞的變化和對氣道炎癥的影響.pdf

1、目的： 1、探討哮喘患者肺部γδT淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化。 2、探討哮喘患者肺部γδT淋巴細(xì)胞增殖活性的變化。 3、評估磁性細(xì)胞分選器(MACS)純化支氣管肺泡灌洗液中γδT淋巴細(xì)胞的效果。 方法： 1、收集哮喘和對照患者的支氣管肺泡灌洗液。 2、顯微鏡下觀察支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞密度。 3、對支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞進(jìn)行分類計數(shù)。 4、利用流式細(xì)胞術(shù)檢測支氣管肺泡灌洗液中γ

2、δT細(xì)胞的比例。 5、用磁性細(xì)胞分選器純化支氣管肺泡灌洗液中的γδT淋巴細(xì)胞。 6、通過臺盼蘭染色、熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)來評估MACS純化支氣管肺泡灌洗液中γδT淋巴細(xì)胞的效果。 7、對純化的γδT淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過MTT比色法檢測γδT淋巴細(xì)胞的增殖活性。 結(jié)果： 1、在純化細(xì)胞之前，對支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，哮喘患者組支氣管肺泡灌洗液中的細(xì)胞密度為(22.5±4.5)×10

3、4個/毫升，高于對照組的(18.8±3.7)×104個/毫升，差異不顯著(t=1.665、P>0.05)。 2、顯微鏡下對細(xì)胞進(jìn)行分類計數(shù)，哮喘組的巨噬細(xì)胞比例為(81±4)％，低于對照組的(86±2)％，有統(tǒng)計學(xué)差異(t=3.122、P<0.01)；哮喘組的淋巴細(xì)胞比例為(15±3)％，高于對照組的(13±2)％，但無統(tǒng)計學(xué)差異(t=1.490、P>0.05)；哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞的比例(3％)高于對照組(<1％)；而中性粒細(xì)胞

4、的比例(1％)也略高于對照組(<1％)。 3、流式細(xì)胞術(shù)檢測表明，哮喘患者組支氣管肺泡灌洗液中γδT淋巴細(xì)胞的百分率為(6.39±0.71)％，高于對照組的(2.62±0.37)％，差異顯著(t=12.449、P<0.01)。 4、MACS純化支氣管肺泡灌洗液中的γδT淋巴細(xì)胞后，在熒光顯微鏡下觀察，γδT細(xì)胞的比例明顯增加，其它細(xì)胞基本消失。流式細(xì)胞術(shù)檢測表明，γδT淋巴細(xì)胞的比例>93％。臺盼蘭染色表明，細(xì)胞存活率>