中藥有效成分靛玉紅對腫瘤細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、目的：中藥抗腫瘤成份靛玉紅可通過3種途徑對腫瘤細(xì)胞的生長發(fā)揮抑制作用，分別為競爭性拮抗CDK激酶的ATP結(jié)合位點；抑制Src激酶、阻斷stat3信號通路；抑制核苷酸轉(zhuǎn)運蛋白。同時靛玉紅可與其配基AhR受體結(jié)合對其自身進行調(diào)控。因此推測靛玉紅可抑制與CDK、Src激酶有關(guān)的人類腫瘤細(xì)胞的生長。本實驗即通過多種腫瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)及MTT方法驗證此推測。同時通過造血祖細(xì)胞體外培養(yǎng)，觀察靛玉紅對造血祖細(xì)胞的影響。 方法：用半固體細(xì)胞集落

2、培養(yǎng)方法觀察靛玉紅對的人白血病細(xì)胞株K562、人胃癌細(xì)胞株、人淋巴瘤細(xì)胞株、人宮頸癌細(xì)胞株Hela、人早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60、肝癌、肝門膽管癌細(xì)胞株的影響。靛玉紅用二甲基亞砜溶解并稀釋為1mg/ml，100μ g/ml，10 μ g/ml不同劑量組，將藥物與細(xì)胞株經(jīng)37℃水浴作用30分鐘后，離心20分鐘，洗去藥物，細(xì)胞重新制成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后加入培養(yǎng)體系，放入37℃飽和濕度5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6天，觀察集落數(shù)目。分別給實驗動物

3、(小鼠、大耳白兔)口服靛玉紅，給小鼠分別口服靛玉紅4mg/kg，8mg/kg，16mg/kg不同劑量，24小時后從小鼠眼眶取血并分離藥物血清；給兔口服靛玉紅藥物膠囊(133mg/kg),分別于服藥后2小時、4小時、6小時、8小時、24小時等不同時間取兔血漿，使用時直接將藥物血清/漿加入培養(yǎng)體系培養(yǎng)6天觀察宮頸癌、胃癌、K562、膽囊癌、肝門膽管癌集落數(shù)目。用MTT方法觀測靛玉紅對K562、膽囊癌、肝門膽管癌細(xì)胞株的影響。同時用半固體細(xì)胞

4、集落培養(yǎng)方法，觀察靛玉紅及其藥物血清/漿對粒系、紅系、巨核系、混合系造血祖細(xì)胞的影響。 結(jié)果：靛玉紅對這幾種腫瘤存在廣泛的抑制作用。 1.靛玉紅對體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用結(jié)果：靛玉紅濃度劑量在0.5-100 μ g/ml范圍內(nèi)體外對人宮頸癌、肝癌、淋巴瘤、肝門膽管癌、人紅白血病K562細(xì)胞株及人早幼粒白血病HL60細(xì)胞株均 2.不同濃度的小鼠藥物血清對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用結(jié)果：小鼠藥物血清對宮頸癌、胃癌

5、存在抑制作用。 3.服用相同劑量靛玉紅的兔藥物血漿對腫瘤紐胞生長的抑制作用結(jié)果：靛玉紅兔藥物血漿對胃癌細(xì)胞株產(chǎn)生明顯的抑制作用，且服藥后2小時即出現(xiàn)顯著抑制作用，其抑制作用維持至服藥后96小時。對于K562、膽囊癌、肝門膽管癌細(xì)胞株，靛玉紅兔藥物血漿的抑制作用在服藥后4-6小時出現(xiàn)，至服藥后96小時作用已有所減弱。 4 藥后24小時不等量鼠藥物血清對K562細(xì)胞的作用結(jié)果：服藥后24小時小鼠藥物血清，0.05ml至0.4

6、ml各組均對K562細(xì)胞存在抑制作用，但0.05ml組對K562細(xì)胞抑制作用較其他劑量(0.1-0.4ml)弱。 5.用MTT方法結(jié)果：靛玉紅兔血漿對K562、膽囊癌、肝門膽管癌細(xì)胞株均存在抑制作用，每種細(xì)胞株對靛玉紅藥物血漿敏感性不同，K562在藥后2至24小時均被抑制，膽囊癌在藥后8小時才出現(xiàn)抑制作用，24小時抑制作用最強，而肝門膽管癌在藥后2小時出現(xiàn)抑制作用，隨后抑制作用逐漸減退。 6.靛玉紅對各系骨髓造血祖細(xì)胞的