藤梨根有效成分對結(jié)腸癌細胞增殖抑制作用及相關機制的研究.pdf

1、EGFR/MAPK信號通路已證明與結(jié)腸癌的增殖，分化，血管形成等密切相關。在我國，藤梨根是獼猴桃的根，臨床廣泛應用于消化道腫瘤的治療，主要活性成分為熊果酸，齊墩果酸等，文獻報道它們具有抗炎，抗腫瘤，保護肝功能，免疫增強等作用，但其確切的作用機制仍未闡明。本論文對熊果酸抑制結(jié)腸癌細胞株增殖及促進凋亡的機制作了初步探討，并觀察與奧沙利鉑合用的體內(nèi)外效果。MTT實驗結(jié)果表明，熊果酸在四對腫瘤細胞株中對結(jié)腸癌細胞株IC50值最低，熊果酸具有比齊

2、墩果酸更強的細胞毒作用。其次熊果酸對EGFR表達陽性的HT-29結(jié)腸癌細胞株的生長抑制與下調(diào)EGFR/ERKl/2的蛋白磷酸化水平相關，Western Blot檢測到caspase-3，9的激活，和BcL-2，BcL-xL的表達抑制。接著我們從基因和蛋白表達水平觀察熊果酸對以SW620，RKO為代表的K-RAS，B-RAF和PIK3CA突變的結(jié)腸癌細胞株的作用靶點。實驗結(jié)果提示熊果酸下調(diào)MAPK，NF-κB信號通路的基因及蛋白磷酸化水平

3、抑制K-RAS和B-RAF突變結(jié)腸癌細胞株增殖及促進凋亡，其中熊果酸與ERKl/2抑制劑U0126合用后對細胞生長的抑制最明顯，實驗結(jié)果也表明熊果酸對K-RAS突變細胞株比B-RAF和PIK3CA突變細胞株細胞毒作用更強，可能與B-RAF和PIK3CA突變后AKT的激活有關。最后我們進一步觀察熊果酸與結(jié)腸癌臨床一線治療的奧沙利鉑合用的體內(nèi)外效果及可能的作用機制，結(jié)果提示兩藥體外合用有協(xié)同作用，SW620裸鼠移植瘤試驗顯示合用有更好的抑瘤

4、效果。移植瘤蛋白檢測發(fā)現(xiàn)熊果酸合用組能顯著下調(diào)ERKl/2，IKKα蛋白磷酸化水平，并且能抑制CD34蛋白的表達；移植瘤的免疫組化結(jié)果也驗證了合用組能抑制腫瘤細胞增殖(PCNA)，促進凋亡（TUNEL），抑制ERKl/2和IKKα蛋白磷酸化水平和CD34蛋白的表達?？傊狙芯拷Y(jié)果提示藤梨根有效成分熊果酸能抑制結(jié)腸癌細胞增殖及誘導凋亡，其抑制增殖的作用可能是通過下調(diào)EGFR/MAPK，NF-κB信號通路蛋白磷酸化水平起作用的，其中抑制E