脊柱手術(shù)出血中間充質(zhì)干細(xì)胞的分離鑒定及數(shù)量變化的研究.pdf

1、目的探討從脊柱手術(shù)出血分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs）的可行性及BMSCs數(shù)與時(shí)間段和年齡的關(guān)系，為脊柱手術(shù)出血中BMSCs的提取再利用打下基礎(chǔ)。方法術(shù)中無(wú)菌條件下用手錐鉆開(kāi)椎弓根拔出手錐后立即吸取釘?shù)览锏某鲅?，?～5min時(shí)段的出血標(biāo)本4例各5ml，采用percoll分離液密度梯度離心法分離血液標(biāo)本，分離出每例標(biāo)本中的單個(gè)核細(xì)胞（MNC），將獲得的細(xì)胞分成4份用

2、含10％的胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液體外爬片培養(yǎng)72小時(shí)全量換液除處懸浮細(xì)胞，以后每3d換液一次，爬片培養(yǎng)至鋪滿蓋玻片約60％左右，用小鼠抗人CD14、CD29、CD34、CD44單克隆抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定細(xì)胞；另15例分3時(shí)段：0～5min、5～10min、10～15min，抽取釘?shù)乐辛鞒龅难海繒r(shí)段各5ml，按先后順序分別記為A組、B組、C組。每例獲取的MNC分別滴加在6孔板中，培養(yǎng)3d后全量換液，PBS液沖洗除去未貼壁細(xì)

3、胞、蘇木素原位染色并計(jì)數(shù)每板孔貼壁細(xì)胞數(shù)。結(jié)果爬片培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定顯示細(xì)胞膜抗原CD34、CD14表達(dá)陰性，CD44、CD29表達(dá)陽(yáng)性。手術(shù)中A組的椎骨出血標(biāo)本中的貼壁細(xì)胞數(shù)（x±s）為262．47±172．20，B組的出血標(biāo)本中的貼壁細(xì)胞數(shù)為1．93±3．63，C組出血標(biāo)本中的貼壁細(xì)胞數(shù)為0．73±1．62。A組標(biāo)本中的貼壁細(xì)胞數(shù)和B組及C組標(biāo)本中的貼壁細(xì)胞數(shù)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0．01），而B(niǎo)組和C組的標(biāo)本中的貼壁