DNA shuffling技術(shù)改造Bt基因的水稻轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、水稻是主要糧食作物之一，全世界有超過(guò)20億的人口以水稻為主食。蟲害是造成水稻減產(chǎn)的主要原因之一。在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中，使用化學(xué)殺蟲劑為減少蟲害損失起到了巨大作用。但是，化學(xué)殺蟲劑的使用會(huì)不可避免的造成環(huán)境污染以及威脅人類健康。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育具有抗蟲性狀的品種是一種控制害蟲的有效方法。 目前使用最廣泛的是Bt基因，其毒蛋白能破壞昆蟲的中腸上皮細(xì)胞，具有高度專一的抗蟲性。然而長(zhǎng)期使用Bt殺蟲使目標(biāo)昆蟲對(duì)Bt毒蛋白產(chǎn)生了耐受性，天然的Bt

2、基因并不總是能達(dá)到良好的殺蟲效果。為了解決此問(wèn)題，我們運(yùn)用DNAShuffling技術(shù)把Bt基因進(jìn)行改組，獲得了一批克隆子。體外喂蟲實(shí)驗(yàn)顯示這些重組后的Bt基因較原始基因殺蟲性有很大提高。 本試驗(yàn)以此為基礎(chǔ)，用優(yōu)良的粳稻品種中花11為受體材料，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法將14個(gè)重組后的Bt基因轉(zhuǎn)入水稻，希望能在水稻中表達(dá)高效的殺蟲蛋白。并且獲得了一批外源基因單拷貝插入，抗蟲性優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因株系。 主要結(jié)果如下：

3、1.挑選了Cry1ab、Cry1Ac、Cry1C、Cry9C和Cry2A重組后的14個(gè)子基因(722，723，724，738，906，983，385，932，936，185，897，977，901，119)以及對(duì)照Cry1Ab，Cry1Ac和Cry2A構(gòu)建了植物表達(dá)載體，并分別轉(zhuǎn)化中花11胚性愈傷；每個(gè)片段平均獲得抗性植株80棵左右。 2.通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)化植株的PCR陽(yáng)性檢測(cè)，獲得了約75％的陽(yáng)性單株。 3.通過(guò)Souther