PEI介導(dǎo)eNOS和vegf基因聯(lián)合體內(nèi)轉(zhuǎn)染對(duì)慢性缺氧誘導(dǎo)小鼠肺動(dòng)脈高壓作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因和血管內(nèi)皮生長因子（vegf）基因聯(lián)合體內(nèi)轉(zhuǎn)染對(duì)小鼠慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓(PAH)的治療作用。
　　方法：構(gòu)建重組質(zhì)粒pBudCE4.1-eNos-DsRed、pBudCE4.1- Vegf-EGFP、pBudCE4.1-eNos-DsRed-Vegf-EGFP。雄性昆明小鼠50只被隨機(jī)分為5組，將PEI/重組質(zhì)粒復(fù)合物以尾靜脈注射方式對(duì)小鼠進(jìn)行體內(nèi)轉(zhuǎn)染。PAH-eNOS(P-E)組，為

2、PAH模型小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pBudCE4.1-eNos-DsRed；PAH-VEGF(P-V)組，為PAH模型小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pBudCE4.1-Vegf-EGFP；PAH-eNOS-VEGF（P-EV）組，為PAH模型小鼠轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pBudCE4.1-eNos-DsRed-Vegf-EGFP；P組，為PAH模型小鼠靜脈注入等量生理鹽水；C組，為正常小鼠注入等量生理鹽水。并采用RT-PCR、real-time PCR方法檢測不同實(shí)驗(yàn)組肺組

3、織Vegf、eNOS mRMA量，用ELISA試劑盒檢測不同實(shí)驗(yàn)組肺組織中VEGF的濃度；用western blot方法檢測肺組織eNos蛋白表達(dá)情況；以硝酸還原酶法測定肺組織的NO含量。30d后測動(dòng)脈血?dú)夥治?、右心肥大指?shù)[右心室／(左心室+室間隔)]、肺小動(dòng)脈形態(tài)計(jì)量學(xué)分析。
　　結(jié)果：1、成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pBudCE4.1-eNos-DsRed、pBudCE4.1-Vegf-EGFP、pBudCE4.1-eNos-DsRed

4、-Vegf-EGFP；2、所構(gòu)建的質(zhì)粒pBudCE4.1-eNos-DsRed、pBudCE4.1-Vegf-EGFP、pBudCE4.1-eNos-DsRed-Vegf-EGFP體外轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞，DsRed、EGFP熒光標(biāo)記基因均有表達(dá)；3、成功的建立了慢性缺氧誘導(dǎo)小鼠肺動(dòng)脈高壓的模型；4、由PEI介導(dǎo)基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染后，外源目的基因eNOS和vegf在肺組織均有表達(dá)；5、eNOS和vegf轉(zhuǎn)基因后檢測的對(duì)各組小鼠PAH相關(guān)指標(biāo)：P-

5、E組、P-V組及P-EV組與P組相比右心室肥厚及肺小動(dòng)脈中膜增厚程度減輕（P<0.05），其中P-EV組右心室肥厚及肺小動(dòng)脈中膜增厚減輕更明顯（P<0.05），但其值仍然高于C組（P<0.05）。
　　結(jié)論：外源性eNOS和vegf基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染，能夠改善慢性缺氧誘導(dǎo)的小鼠肺動(dòng)脈高壓模型的肺血管重構(gòu)，使中小動(dòng)脈血管增厚減輕，右心肥大指數(shù)增加減少。且eNOS和vegf雙基因的體內(nèi)轉(zhuǎn)染對(duì)緩解小鼠慢性缺氧性肺動(dòng)脈高壓的作用大于eNOS和v