DHA抗缺氧性肺動脈高壓的離子機制.pdf

1、目的:
　　 ω-3類脂肪酸可通過抗炎、抗血小板聚集、抗血栓形成、調(diào)節(jié)脂肪代謝、改善內(nèi)皮細胞功能等發(fā)揮其防治心血管疾病的功效。作為其主要成分之一的二十二碳六烯酸(DHA)能通過調(diào)節(jié)心肌細胞及冠狀動脈平滑肌細胞上的多種離子通道而起抗心律失常及擴張冠狀動脈等作用。本研究擬采用血管功能試驗及膜片鉗技術(shù)探討DHA對低氧誘導(dǎo)的肺血管收縮的影響及電生理機制。
　　 方法:
　　 (1)將大鼠三級肺動脈制備成去除內(nèi)皮的血管環(huán)，

2、急性缺氧溶液誘導(dǎo)血管環(huán)收縮后，用DHA處理血管環(huán)，測定其對血管張力的作用。(2)急性酶解法分離出單個活性良好的肺動脈平滑肌細胞(PASMC)，免疫熒光鑒定細胞類型。(3)建立大鼠PASMCs全細胞膜片鉗的方法并觀察DHA對PASMCs細胞膜上鉀離子通道的作用。
　　 結(jié)果:
　　 (1)急性酶解法獲得單個PASMC，呈梭形，香蕉狀，表面光滑，邊界清楚。α—actin免疫熒光鑒定分離所得的細胞為平滑肌細胞。
　　

3、(2)全細胞膜片鉗技術(shù)記錄電壓門控性鉀離子通道(KV)和鈣離子激活性鉀通道(KCa)電流。5mmol/L的KV通道特異性抑制劑4-氨基吡啶（4-AP）可明顯抑制所記錄電流，使電流-電壓曲線向右下移，引起大鼠PASMCs去極化;+60mV時電流密度從（134.69±4.73pA/pF）減少到（35.02±5.64pA/pF,p＜0.05）。1mmol/L的KCa通道特異性抑制劑四乙胺(TEA)可明顯抑制所記錄電流，使電流電壓-曲線向右下移

4、;在+60mV時，KCa電流密度從（15.10±1.62pA/pF）減少到(3.82±0.72pA/pF,p＜0.05)。
　　 (3)DHA(1μmol/L，10μmol/L)可顯著舒張急性缺氧誘發(fā)的血管收縮(p＜0.05，n=6)，最大舒張率為(48.63±9.16)％。
　　 (4)DHA可顯著激活總鉀離子電流(p＜0.01）。在指令電位+60mV時，細胞外給予DHA（10μmol/L）后，該電流由（121.52±

5、17.43pA/pF）增加至(209.81±12.57pA/pF)。該鉀電流為混合電流，能被蝎毒素(IBTX)和4-AP部分阻斷。DHA對KV通道可產(chǎn)生顯著抑制作用(p＜0.05，n=6），指令電壓+60mV時的抑制率是(63.21±7.32)％。當DHA濃度為0.01μmol/L時，大電導(dǎo)鈣激活的鉀離子電流(IBKCa)無顯著激活作用;當濃度為0.1，1，10μmol/L時，可顯著激活I(lǐng)BKCa。不同濃度DHA(0，0.1，1，10)

6、μmol/L在指令電壓+60mV時，IBKCa電流密度分別為(30.5±6.5,59.4±5.8,87.2±4.3,117.3±7.1)pA/pF(p＜0.01,n=5)。
　　 (5)急性缺氧，指令電壓為+60mV時，IBKCa電流密度從(32.7±8.5)pA/pF降低至（11.9±5.8）pA/pF(p＜0.01，n=5）。DHA(10μmol/L)能明顯逆轉(zhuǎn)急性缺氧對IBKCa的抑制作用(p＜0.01，n=5)。