反應性氮代謝物及其清除劑對NK細胞抗K562細胞作用的影響.pdf

1、目的：探討外源性、內(nèi)源性反應性氮代謝產(chǎn)物(RNM)對NK細胞抗K562細胞活性的影響；硫普羅寧、還原型谷胱甘肽和二氫氯組胺清除外源性、內(nèi)源性RNM、保護NK細胞的作用。 方法：1.在NK+K562(E/T=10/1)細胞培養(yǎng)體系中，先后加入外源性ONOO-及其清除劑硫普羅寧、還原型谷胱甘肽和二氫氯組胺，分別觀察RNM、K562細胞抑制率、TNF-β、IFN-γ的產(chǎn)量及6小時、24小時NK活細胞百分率變化。2.采用IL-2及PHA

2、為激活劑，加入MO+NK+K562(E/T=10/1，E/MO=10/2)細胞培養(yǎng)體系中，產(chǎn)生內(nèi)源性RNM，觀察不同濃度的硫普羅寧、還原型谷胱甘肽和二氫氯組胺組對RNM的清除作用及K562細胞抑制率、TNF-β、IFN-γ的變化。 結(jié)果：1.在NK+K562(E/T=10/1)細胞培養(yǎng)體系中，加入外源性ONOO-后，K562活細胞數(shù)量和NK細胞活性顯著降低；而在NK+K562+ONOO-(E/T=10/1)組中加入硫普羅寧、還原

3、型谷胱甘肽RNM，分別從260.30±9.51umom/L降低到178.65±10.00 umom/L、185.02±8.166umom/L、二氫氯組胺組無清除作用；NK活細胞百分比分別從79.87±1.021％上升到91.133±0.67％、88.03±1.46％、82.6±0.76％；K652細胞抑制率(KIR)從43.84±0.178％上升到59.35±1.078％、56.64±0.827％、51.41±1.47％；同樣TNF-β

4、、IFN-γ產(chǎn)量和較對照組升高。在清除外源性RNM、保護NK細胞、提高NK細胞抗K562細胞活性方面，硫普羅寧與還原型谷胱甘肽作用相似(P>0.05)，但均顯著優(yōu)于二氫氯組胺(P<0.01)2.在IL-2/PHA+NK+MO+K562混合培養(yǎng)體系中，加入不同濃度硫普羅寧、還原型谷胱甘肽和二氫氯組胺后，三種藥物在清除內(nèi)源性RNM方面保護NK細胞方面與清除外源性RNM作用相似，TIP組、GSH組隨著各藥物濃度的增加，RNM、ROM產(chǎn)量逐漸減

5、少，而TNF-β、IFN-γ產(chǎn)量和KIR則逐漸升高；DHT不能清除RNM。 結(jié)論：外源性ONOO-對NK、K562細胞有毒性，可使NK細胞的抗瘤(抗K562)活性下降；MO呼吸爆發(fā)產(chǎn)生的RNM、ROM可使NK細胞的抗瘤(抗K562)活性下降。硫普羅寧、還原型谷胱甘肽均可通過清除ROM、RNM保護NK細胞，提高NK細胞抗瘤活性，且對ROM、RNM的清除表現(xiàn)出一定的量效關系。在清除ROM、RNM及提高NK細胞對K562細胞的抑制率方