用于肝癌潛在血清標志物鑒定的抗體芯片技術(shù).pdf

1、肝癌是最常見的惡性腫瘤之一，肝癌的早期診斷是提高患者生存率的關(guān)鍵。目前的肝癌診斷主要是通過包括甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)的血清學水平檢測并結(jié)合肝臟的影像學檢測進行的超聲造影，但是由于缺乏足夠的診斷敏感性而難以實現(xiàn)肝癌的早期診斷。因此，發(fā)現(xiàn)新的血清蛋白標志物對于肝癌的臨床診斷具有重要價值，目前通過分析肝癌組織和健康組織中蛋白質(zhì)表達水平的差異，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多潛在的蛋白質(zhì)標志物，但大部分都沒有經(jīng)過血清學的鑒定研究。

2、為此，本文擬通過抗體芯片技術(shù)來開展肝癌潛在血清標志物的鑒定研究。
　　 目的：建立一種基于抗體芯片的通量化檢測技術(shù)，應用于肝癌潛在血清標志物的鑒定研究，為肝癌的早期診斷和預后監(jiān)測奠定基礎。
　　 方法：在醛基修飾的玻片表面制備了針對14種肝癌潛在血清蛋白標志物的抗體微陣列，按照標準的臨床血清樣本采集程序共采集了44例肝癌和46例健康者的血清樣本，采用對血清樣本直接進行生物素標記的抗體芯片分析策略，通過對肝癌患者與健康者血

3、清樣本中這些潛在蛋白標志物的表達水平進行差異分析，來實現(xiàn)對這些潛在標志物的血清學鑒定。
　　 結(jié)果：建立起了針對直接標記血清樣本的抗體芯片分析技術(shù)的優(yōu)化條件：如采用5％的脫脂奶粉作為芯片的封閉劑，室溫封閉1小時；在生物素標記試劑與血清蛋白的質(zhì)量比為1∶40，血清樣本的最終稀釋比例為1∶200時，可獲得理想的芯片檢測效果。抗體芯片對90例血清樣本的初步檢測結(jié)果表明HSP70、CK19、GPC3、PTMA、AFU、GP73、HBXA

4、g、CA125等8種潛在蛋白標志物的表達水平在肝癌和健康者血清中存在統(tǒng)計學差異，8種血清蛋白潛在標志物指標聯(lián)合檢測肝癌的陽性預測率可達到88.6％、特異性達到97.8％。
　　 結(jié)論：所建立的基于血清樣本生物素直接標記的抗體芯片分析策略，是一種有效的可同時檢測多種蛋白指標在血清中表達情況的通量化分析技術(shù)，不僅可以完成14種肝癌潛在標志物的血清學鑒定，而且也可以通過擴展研究實現(xiàn)對更多肝癌潛在標志物的鑒定以及為其他疾病潛在標志物的血