尿道下裂病人MID1基因變異篩查.pdf

1、尿道下裂是男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的先天性畸形之一,是一種原因不明的性別分化異常,主要表現(xiàn)為尿道外口異位,陰莖彎曲畸形,陰莖背側(cè)包皮堆積等.其發(fā)病率在0.4‰-8.2‰之間,在許多國家中尿道下裂的發(fā)病率具有增加的趨勢,重型尿道下裂所占的比例也在逐漸增多.以96例尿道下裂患者的基因組DNA作為模板,擴(kuò)增了MID1基因的全部外顯子,利用PCR產(chǎn)物直接測序的方法來篩選MID1基因外顯子核苷酸序列的變異.基本技術(shù)路線為:①設(shè)計PCR引物→優(yōu)化PC

2、R反應(yīng)條件→目的片段的PCR擴(kuò)增→PCR產(chǎn)物純化→使用自動測序儀進(jìn)行序列測定.將得到的測序結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列相比較,找出變異位點(diǎn).②將發(fā)生變異的樣本重復(fù)上述的PCR擴(kuò)增、純化和測序過程,驗(yàn)證測序結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性.③對于已經(jīng)驗(yàn)證確定的結(jié)果,根據(jù)變異所在的部位,分析其編碼氨基酸的改變類型,以及對蛋白功能可能產(chǎn)生的影響.我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,尿道下裂患者中存在MID1基因變異,但不是其主要的致病基因,還有別的因素參與了尿道下裂的發(fā)生,有待于進(jìn)