應(yīng)用TLR8配體增強(qiáng)Lewis肺癌小鼠抗腫瘤免疫應(yīng)答.pdf

1、目的:探討應(yīng)用TLR8配體CL075(thiazoloquinolinecompound)和Poly(dT)(thymidinehomopolymerphosphorothioateODN)刺激后,TLR8及其相關(guān)細(xì)胞因子IL-12、IL-10在小鼠DC2.4細(xì)胞中的表達(dá)情況;建立小鼠Lewis肺癌模型,觀察TLR8配體對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響,并研究其調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫應(yīng)答的機(jī)制,為臨床對(duì)肺癌的治療提供新的思路和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法:(

2、1)常規(guī)培養(yǎng)DC2.4細(xì)胞,光學(xué)顯微鏡觀察未刺激組、Poly(dT)刺激組、CL075和Poly(dT)共同刺激組細(xì)胞的形態(tài)變化。(2)通過qRT-PCR測(cè)定DC2.4細(xì)胞hhTLR8、IL-12、IL-10的mRNA表達(dá)。(3)通過ELISA測(cè)定DC2.4細(xì)胞中IL-12、IL-10的蛋白表達(dá)。(4)通過Westernblot測(cè)定DC2.4細(xì)胞中TLR8的蛋白表達(dá)。(5)建立小鼠Lewis肺癌模型,觀察經(jīng)TLR8配體處理后腫瘤的發(fā)展進(jìn)

3、程。(6)取各實(shí)驗(yàn)組小鼠引流淋巴結(jié)及脾臟利用qRT-PCR法檢測(cè)TLR8、IL-12、IL-10的mRNA表達(dá)水平。(7)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠體內(nèi)DC細(xì)胞TLR8的表達(dá)、CD3+CD8+IFNу+T細(xì)胞及CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的變化情況。
　　 結(jié)果:(1)未刺激及Poly(dT)刺激組細(xì)胞較幼稚,樹突較短且少;CL075和Poly(dT)刺激組細(xì)胞活化,樹突增多且伸長(zhǎng)。(2)Poly(dT)刺激組DC2.

4、4細(xì)胞中TLR8、IL-12、IL-10的mRNA及蛋白表達(dá)量與陰性對(duì)照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;CL075和Poly(dT)刺激組DC2.4細(xì)胞中TLR8、IL-12的mRNA及蛋白表達(dá)量較陰性對(duì)照組明顯升高(P＜0.05或P＜0.01),而IL-10的mRNA及蛋白表達(dá)量則明顯低于陰性對(duì)照組(P＜0.01或P＜0.05)。(3)CL075和Poly(dT)能夠有效地延緩Lewis肺癌小鼠體內(nèi)腫瘤的進(jìn)展,抑制腫瘤的生長(zhǎng)。qRT-PCR及F

5、CM檢測(cè)結(jié)果顯示,經(jīng)CL075和Poly(dT)處理后,其局部引流淋巴結(jié)、脾臟中TLR8、IL-12的mRNA表達(dá)水平明顯增加,而IL-10的mRNA表達(dá)水平下降;DC表面TLR8的表達(dá)、CD3+CD8+IFNу+T細(xì)胞的比例明顯上升;淋巴結(jié)中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的比例明顯下降,而脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的比例與對(duì)照組相比無明顯差異。
　　 結(jié)論:(1)應(yīng)用TLR8配體后,TLR8、