大黃_蟲丸對Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫機制影響的實驗研究.pdf

1、目的：探討經(jīng)方大黃(庶蟲)蟲丸對Lewis肺癌荷瘤小鼠被動吸煙條件下免疫狀態(tài)（CD4+CD25+Foxp3+水平和Foxp3基因表達情況）的干預作用，為提高和預防肺癌患者生存質(zhì)量提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.制備 Lewis肺癌荷瘤小鼠：選取清潔級昆明小鼠，將培養(yǎng)好的小鼠Lewis肺癌細胞（LLC），用生理鹽水稀釋，調(diào)整細胞濃度為1×107/ml，于小鼠右腋部皮下注射0.2ml/只進行造模。10天后，將腋下成瘤0

2、.5cm×0.6cm以上的小鼠64只，隨機分成模型對照組（模型組）、被動吸煙組（煙熏組）、大黃(庶蟲)蟲丸組（中藥組）、順鉑組（西藥組），未造模的小鼠為空白對照組（空白組），每組16只，共5組。
　　2.給藥：被動吸煙組、大黃(庶蟲)蟲丸組與順鉑組小鼠均給予被動吸煙，即在動式染毒柜中，采取動式吸入香煙煙霧，主流煙霧和側(cè)流煙霧分別控制在11％和89%。每天染毒6h。同時，大黃(庶蟲)蟲丸組給予大黃(庶蟲)蟲丸按1.37g/kg/d給

3、藥，灌胃量0.4ml，每天l次，連續(xù)28d。順鉑組給予順鉑按lmg/kg腹腔注射(iP)，第4、11、18、25天各1次；空白組、模型組灌胃按等容積給蒸餾水，灌胃量0.4ml，每天l次，連續(xù)28d。
　　3.檢測指標：分別于7、14、21、28天，觀察小鼠的精神、活動、毛色、飲食情況；分別于14、28天，測各組小鼠體重、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)；檢測血清IL-2含量、脾組織CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細胞的比例及轉(zhuǎn)錄

4、因子 Foxp3基因表達情況；各組小鼠肺組織、腋部皮下瘤塊石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察組織的病理形態(tài)學改變。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況：與空白組比較，造模后小鼠的精神、活動、毛色、進食量和飲水量、體重增長均受到影響，其中被動吸煙組影響最明顯，體重增長減慢較顯；與被動吸煙組比較，大黃(庶蟲)蟲丸組精神有所改善，活動和飲食量有所增加，體重增長較明顯，順鉑組精神、活動無明顯變化，體重降低顯著；與順鉑組比較，大黃(庶蟲)蟲

5、丸組小鼠精神狀態(tài)有所改善，活動和飲食量有所增加，體重增長明顯。
　　2.臟器指數(shù)：與空白組比較，造模后小鼠的臟器指數(shù)均有所降低，順鉑組降低最明顯，2周時脾指數(shù)有顯著性差異，4周時胸腺指數(shù)與脾指數(shù)降低均有非常顯著性差異；與被動吸煙組比較，大黃(庶蟲)蟲丸臟器指數(shù)有所提高，2周時無顯著性差異，4周時出現(xiàn)顯著性差異；與順鉑組比較，大黃(庶蟲)蟲丸組小鼠脾指數(shù)提高，并有顯著性差異。
　　3.形態(tài)學改變：與空白組比較，造模后小鼠肺組織

6、可見異型性細胞,細胞核大、深染,可見異常核分裂象；被動吸煙可使小鼠肺組織異型性細胞明顯增多，可見異型性細胞成半環(huán)狀及環(huán)狀排列，病灶周圍伴有肺氣腫形成、出血及炎細胞浸潤；大黃(庶蟲)蟲丸可使被動吸煙的模型小鼠肺組織異型性細胞減少，病變減輕；順鉑可使小鼠肺組織異型性細胞明顯減少，病變減輕，可見個別異型性細胞,偶見細胞核分裂。4周后造模小鼠異型性細胞較2周多，可見明顯異型性細胞成半環(huán)狀及環(huán)狀排列，有肺泡間隔增厚和炎細胞浸潤現(xiàn)象。
　　4

7、.免疫指標IL-2：與空白組比較，造模后小鼠血清中細胞因子IL-2含量均減少，模型組小鼠有顯著性差異，其中被動吸煙組減少最顯著，有非常顯著性差異；與被動吸煙組比較，大黃(庶蟲)蟲丸組、順鉑組小鼠血清中細胞因子IL-2含量均增多，均有顯著性差異；大黃(庶蟲)蟲丸組與順鉑組比較，大黃(庶蟲)蟲丸提高較明顯，但無顯著性差異。4周結(jié)果與2周相同。
　　5.免疫指標CD4+CD25+Foxp3+：2周后，與空白組比較，造模小鼠脾組織CD4+

8、CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細胞的比例均提高，其中被動吸煙組提高最顯著，并有非常顯著性差異；與被動吸煙組比較，大黃(庶蟲)蟲丸組、順鉑組小鼠脾組織CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細胞的比例有所下調(diào)，順鉑組下調(diào)較明顯，但均無顯著性差異；與順鉑組比較，大黃(庶蟲)蟲丸組有所上調(diào)，但無顯著性差異。
　　4周后，與空白組比較，造模小鼠脾組織CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T細胞的比例均提高，

9、均有顯著性差異；與模型組比較，被動吸煙組、大黃(庶蟲)蟲丸組、順鉑組小鼠脾組織 CD4+CD25+Foxp3+Treg占 CD4+T細胞的比例均下調(diào)，均無顯著性差異；與被動吸煙組比較，大黃(庶蟲)蟲丸組、順鉑組均有下調(diào)，順鉑組下調(diào)較明顯，但均無顯著性差異。
　　6.Foxp3基因表達：2周后，與空白組比較，造模小鼠的脾組織Foxp3基因表達均增強，被動吸煙組最明顯，有非常顯著性差異；與被動吸煙組比較，大黃(庶蟲)蟲丸組、順鉑組脾組

10、織Foxp3基因表達均下降，并均有非常顯著性差異；大黃(庶蟲)蟲丸組與順鉑組相比，順鉑組脾組織Foxp3基因表達下降，有顯著性差異。
　　4周后，與空白組比較，模型組、大黃(庶蟲)蟲丸組與順鉑組小鼠Foxp3基因表達水平均增強，模型組有非常顯著性差異，被動吸煙組小鼠Foxp3基因表達水平下降，有顯著性差異；與模型組比較，被動吸煙組、大黃(庶蟲)蟲丸組與順鉑組均下降，被動吸煙組、順鉑組均有非常顯著性差異，大黃(庶蟲)蟲丸組無差異；與

11、被動吸煙組比較，大黃(庶蟲)蟲丸組與順鉑組小鼠均增強，均有顯著性差異；大黃(庶蟲)蟲丸組與順鉑組小鼠Foxp3基因表達水平無顯著性差異。
　　結(jié)論
　　1.Lewis肺癌細胞可引起昆明種小鼠腋下瘤塊形成；
　　2.被動吸煙對Lewis肺癌荷瘤小鼠一般情況、體重、臟器指數(shù)、形態(tài)學改變及免疫指標均有明顯影響（P<0.05或P<0.01）；
　　3.大黃(庶蟲)蟲丸對Lewis肺癌荷瘤小鼠被動吸煙條件下的一般情況、體重