“勞倦過(guò)度、房室不節(jié)”腎陽(yáng)虛模型小鼠及其以藥反證腦基因表達(dá)譜的研究.pdf

1、目的：本研究旨在利用基因芯片技術(shù)探討“勞倦過(guò)度、房室不節(jié)”腎陽(yáng)虛模型小鼠及其補(bǔ)腎中藥金匱腎氣丸、右歸丸治療后腦基因表達(dá)譜的改變，“以藥反證”，并在分子水平上研究藥物的作用機(jī)理，同時(shí)還比較二方劑作用的基因變化。 方法：對(duì)照組、造模組、金匱腎氣丸組和右歸丸組，各組雄性小鼠隨機(jī)為10只、15只、10只和10只。四組均予正常喂養(yǎng)，對(duì)照組和造模組每天灌胃蒸餾水0．5mL/只，二治療組每天分別灌胃金匱腎氣丸混懸液0．5mL/只和右歸丸混懸液

2、0．5mL/只，造模組和二治療組均采用雄雌鼠比例1：6同籠喂養(yǎng)和雄鼠每日游泳至無(wú)力下沉共4周，以誘導(dǎo)產(chǎn)生“勞倦過(guò)度、房室不節(jié)”腎陽(yáng)虛證。用36K mouse genome array鼠腦芯片檢測(cè)正常對(duì)照組和腎陽(yáng)虛模型組鼠腦基因，并以二者熒光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度比值≥2和≤0．5篩選差異顯著基因，并進(jìn)一步查閱北京博奧生物分子注釋系統(tǒng)，進(jìn)行基因功能歸類。為進(jìn)一步驗(yàn)證芯片所檢測(cè)的差異基因，還應(yīng)用Real-Time PCR對(duì)部分差異顯著基因進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證

3、。 結(jié)果：造模組誘導(dǎo)成功“勞倦過(guò)度、房室不節(jié)”腎陽(yáng)虛鼠模型，同時(shí)通過(guò)基因芯片檢測(cè)，分別繪制了造模組/對(duì)照組與二治療組/造模組基因表達(dá)譜的散點(diǎn)圖。造模組/對(duì)照組共篩選出186個(gè)差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因150個(gè)，下調(diào)基因36個(gè)。金匱腎氣丸組/造模組篩選出299個(gè)差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因114個(gè)，下調(diào)基因185個(gè)。右歸丸組/造模組篩選出155個(gè)差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因64個(gè)，下調(diào)基因91個(gè)。二治療組/造模組基因均上調(diào)的基因24個(gè)

4、，分別占各組上調(diào)基因的21．05%和37．50%，其主要是與神經(jīng)傳遞/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄/翻譯、激素、細(xì)胞周期和代謝相關(guān)的基因；二治療組均下調(diào)的有35個(gè)基因，分別占各組下調(diào)基因的18．92%和38．46%，其主要是與轉(zhuǎn)錄/翻譯、神經(jīng)傳遞/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、炎癥/免疫、代謝以及影響多巴胺生成的限速酶有關(guān)基因。造模組/對(duì)照組上調(diào)基因而治療組/造模組基因下調(diào)的有23個(gè)基因，其主要是與炎癥/免疫、神經(jīng)傳遞/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等相關(guān)基因；造模組/對(duì)照組下調(diào)基因而治療組

5、/造模組基因上調(diào)的基因有6個(gè)，其主要是與細(xì)胞周期/細(xì)胞結(jié)構(gòu)、神經(jīng)傳遞/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄等有關(guān)基因。 結(jié)論：造模組上調(diào)基因主要涉及與炎癥/免疫、氧化應(yīng)激等有關(guān)基因，使得炎癥/免疫和氧化反應(yīng)增強(qiáng)，創(chuàng)傷、損傷反應(yīng)和凝血機(jī)制增強(qiáng)，這些都是機(jī)體的保護(hù)性反應(yīng)所致，還有多巴胺神經(jīng)介質(zhì)分泌減少引起多巴胺能神經(jīng)紊亂。下調(diào)基因主要與激素（特別是黑色素濃集素和性激素）、細(xì)胞周期、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)/神經(jīng)傳遞、代謝（特別是蛋白質(zhì)代謝）和生長(zhǎng)發(fā)育（特別是腦發(fā)育和精子