As-,2-O-,3-合并TPA誘導(dǎo)HL-60細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的:本課題采用不同濃度的As2O3聯(lián)合TPA作用于體外培養(yǎng)人白血病細胞系HL-60的方法，從形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)方面，分析不同濃度的As2O3以及聯(lián)合TPA對HL-60細胞的誘導(dǎo)分化及凋亡作用特點，并探討其誘導(dǎo)分化及凋亡的機制。 對象與方法:1.HL-60細胞(目前認為是M2型白血病細胞株)培養(yǎng)于含15％滅活胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)(CO2濃度為5％，相對濕度為95％，溫度為37℃)。

2、　　2.在細胞對數(shù)生長期取適量，離心，去除上清，用RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)制成密度為5～10×105個/ml。隨機分為八組，每組9ml。分別為：①對照組：(自身對照，條件同TPA組，只是不加TPA)；②TPA組：加入TPA(終濃度為1.6×10-8mol/L)；③As2O3組：細胞培養(yǎng)24小時后加入As2O3(終濃度分別為0.2×10-6mol/L、2.0×10-6mol/L、20×10-6mol/L)；④TPA+As2O3組：加入T

3、PA(終濃度為1.6×10-8mol/L)誘導(dǎo)24小時后加入不同濃度的As2O3(As2O3的終濃度為分別為0.2×10-6mol/L、2.0×10-6mol/L、20×10-6mol/L),常規(guī)培養(yǎng)?！　?.觀察指標：①細胞形態(tài)學(xué)改變：于培養(yǎng)24小時，48小時，72小時，在倒置顯微鏡下觀察活細胞的生長狀況；②活細胞臺盼蘭計數(shù)；③MTT比色法測定細胞增殖情況：培養(yǎng)72小時后每孔加入5g/LMTT20μl，用酶標儀(λ490nm)測定每