mtDNA單倍型M-N及核SNP STAT4rs3821236與湖南漢族女性SLE的相關(guān)性研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種多重遺傳因素和環(huán)境因素相互作用的復(fù)雜疾病，功能基因篩選法和全基因組關(guān)聯(lián)分析(genome-wide association study，GWAS)是基于查找病例-對照之間存在頻率差異的遺傳多態(tài)性發(fā)現(xiàn)疾病易感基因的主要方法，其中最常見的遺傳多態(tài)性是單核苷酸多態(tài)性(single nucleotidepolymorphism，SNP)，但上述方法存在多中心

2、研究結(jié)果不一致等問題，需要反復(fù)驗證和生物學(xué)功能驗證。目前發(fā)現(xiàn)眾多的SLE易感基因，其中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducer and activator oftranscription4，STAT4)因參與SLE的多種免疫紊亂備受關(guān)注;另外對凋亡及炎癥反應(yīng)具有重要調(diào)節(jié)功能的線粒體DNA(mitochondria DNA，mtDNA)在SLE中的探討較少。在多個獨立樣本中重復(fù)驗證STAT4SNPs與SLE的關(guān)聯(lián)性及進行

3、深入的生物功能學(xué)驗證是一項重要任務(wù)，同時發(fā)現(xiàn)新的可能與SLE相關(guān)聯(lián)的mtDNA多態(tài)性是另一項充滿吸引力的工作。
　　目的:
　　以湖南地區(qū)漢族女性為對象，1）探討通過特征mtSNPs8701A/G、10398A/G和10400C/T區(qū)分的漢族人M和N宏單倍型組之間的SLE風(fēng)險差異性;2）分析核基因STA T4中SNP rs3821236G/A的SLE風(fēng)險相關(guān)性，并初步比較兩種SNP基因型攜帶者之間STAT4mRNA的表達水平

4、差異。
　　方法:
　　采用等位基因特異性擴增方法、PCR-RFLP（PCR-restrictionfragment length polymorphism）分析進行SLE-對照大樣本個體mtDNAM/N分型、STAT4rs3821236等位基因分型，并分析其組間頻率分布差異及與SLE各臨床表型的相關(guān)性。利用qRT-PCR檢測SLE及對照外周血有核細(xì)胞總STAT4，及異構(gòu)體STAT4α、STAT4β mRNA表達水平。

5、>　　結(jié)果:
　　1）868例女性SLE患者中mtDNA M和N單倍型個體分別為429例(49.4％)、439例(50.6％)，870例對照組中分別為456例(52.4％)、414例(47.6％)，二者無顯著性差異(P=0.213)，但與≧50歲的健康對照相比，mtDNA N單倍型頻率在≧50歲的SLE病例組升高（59.6％ vs41.7％，P=0.042）。進一步分析mtDNA M/N單倍型與SLE起病年齡、有無狼瘡腎炎等臨床表

6、型的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)mtDNA N單倍型可能為SLE發(fā)生血液系統(tǒng)損害（P=0.000，OR=2.128）、皮膚損害(P=0.000，OR=1.873)、神經(jīng)系統(tǒng)改變(P=0.000，OR=3.956)及脫發(fā)(P=0.044，OR=1.322)的危險因素。
　　2）PCR-RFLP(BanⅠ)方法成功進行了STAT4rs3821236 G/A等位基因分型。
　　3）475例女性SLE患者中STAT4rs3821236AA、AG、G

7、G雙等位基因型個體分別為125例(26.3％)、238例(50.1％)、112例(23.6％)，548例健康對照中三種基因型個體分別為105例(19.2％)、249例(45.4％)、194例(35.4％)，兩組間A基因型頻率分別為51.4％、41.9％，即SLE組STAT4rs3821236 AA雙等位基因型及A基因型頻率明顯升高（P=8×10-5，OR=1.656; P=1.76×10-5，OR=1.466）。同時分析其與SLE發(fā)病年

8、齡等臨床表型相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)STAT4rs3821236A基因型可能增加狼瘡腎炎(P=0.026，OR=1.345)、脫發(fā)的風(fēng)險(P=0.000，OR=1.684)。
　　4)與19例正常對照相比，11例活動期SLE患者總STAT4mRNA表達升高1.044倍，STAT4α升高約1.103倍，而STAT4β降低約0.819倍;在11例SLE患者中攜帶STAT4rs3821236風(fēng)險基因型（AA+AG）的個體總STAT4、STAT4α、

9、STAT4β mRNA表達水平分別上升2.288倍、1.763倍、1.981倍。
　　結(jié)論:
　　1) mtDNAN單倍型增大湖南漢族女性攜帶者晚發(fā)SLE發(fā)病風(fēng)險;并且攜帶mtDNAN單倍型的患者更容易發(fā)生皮膚損害、血液系統(tǒng)損害、神經(jīng)系統(tǒng)改變及脫發(fā)。
　　2）STAT4rs3821236A基因型及AA雙等位基因型增大湖南漢族女性攜帶者發(fā)生SLE的風(fēng)險;且STAT4rs3821236A基因型增加SLE患者發(fā)生狼瘡腎炎及脫