蓖麻蠶和柞蠶核型多角體病毒經(jīng)口感染及其解旋酶基因的分析.pdf

1、桿狀病毒是有囊膜的雙鏈閉合環(huán)狀DNA大形病毒，其基因組大小為80-180kb，主要以鱗翅目昆蟲為宿主，迄今僅從節(jié)肢動(dòng)物(絕大部分從昆蟲)中分離出來(lái)，而且都具有高度的宿主特異性。蓖麻蠶(Philosamia cynthia ricini)和柞蠶(Antheraea pernyi)都是具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的泌絲昆蟲，都容易被核型多角體病毒感染。柞蠶核型多角體病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus，Anp

2、eNPV)的基因組序列已經(jīng)完成，而對(duì)蓖麻蠶核型多角體病毒(Philosamia cynthia ricini nucleopolyhedrovirus，PcrNPV)的基因組序列則知之甚少。以前的研究發(fā)現(xiàn)這兩種病毒在感染性上有一定聯(lián)系，為了弄清它們之間的關(guān)系，本論文分離純化了蓖麻蠶和柞蠶核型多角體病毒，對(duì)其感染性進(jìn)行了研究，并對(duì)這兩種病毒的解旋酶(helicase)基因進(jìn)行了分析。從而了解這兩種病毒的相互感染特性，查明昆蟲病毒的宿主特異

3、性或宿主域，對(duì)進(jìn)一步了解桿狀病毒宿主域決定機(jī)制打下基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)論如下： 1、分離純化了蓖麻蠶和柞蠶核型多角體病毒，經(jīng)電鏡觀察，兩種多角體大多呈大小均一的三角體，大小為1-3 μm。 2、用經(jīng)口感染的方法觀察柞蠶和蓖麻蠶幼蟲食下后的變化。經(jīng)鏡檢發(fā)現(xiàn)AnpeNPV能感染柞蠶和蓖麻蠶幼蟲，感染率分別為78％和57％。純化病蟲尸體中收集的多角體，提取DNA，進(jìn)行Hind Ⅲ、SalⅠ、XhoⅠ和PstⅠ酶切圖譜鑒定，結(jié)果

4、發(fā)現(xiàn)酶切圖譜與添毒多角體DNA的酶切圖譜一致；而PcrNPV只能感染蓖麻蠶幼蟲，感染率為79％，對(duì)柞蠶幾乎沒(méi)有感染力。 3、PcrNPV與AnpeNPV基因組DNA分別轉(zhuǎn)染BmN和Tn5昆蟲細(xì)胞系，細(xì)胞都沒(méi)有明顯的感染癥狀。 4、進(jìn)一步構(gòu)建了PcrNPV DNA PstⅠ酶切片段文庫(kù)，挑取陽(yáng)性克隆測(cè)序，測(cè)得的序列與AnpeNPV基因組序列的同源性均在95％以上，所以PcrNPV與AnpeNPV的同源性非常高。 5、hel

5、icase基因氨基酸同源性構(gòu)建的分子進(jìn)化樹(shù)狀圖表明：PcrNPV與AnpeNPV的helicase基因進(jìn)化關(guān)系較近，而與AcMNPV及BmNPV等的進(jìn)化關(guān)系較遠(yuǎn)。 6、分析了PcrNPV和AnpeNPV的helicase基因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PcrNPVhelicase基因與AnpeNPV的helicase基因在桿狀病毒的宿主域決定區(qū)、核定位信號(hào)區(qū)和C端7個(gè)基序上，氨基酸序列完全相同，僅在靠近DNA結(jié)合區(qū)螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)處(974位