康復(fù)訓(xùn)練聯(lián)合NGF對(duì)腦缺血大鼠行為學(xué)及BDNF、Bax表達(dá)的影響.pdf

1、背景:
　　 運(yùn)動(dòng)功能障礙、吞咽困難、失語(yǔ)、視覺(jué)障礙等都是有幸存活下來(lái)的腦卒中患者較常見(jiàn)的后遺癥。近年來(lái)，為了更好的改善腦卒中患者殘余的功能障礙，許多新的康復(fù)方法已經(jīng)被應(yīng)用?？祻?fù)治療的效果雖然已經(jīng)得到國(guó)際公認(rèn)，但缺血性腦卒中存在非常復(fù)雜的病理生理機(jī)制，有多種病理環(huán)節(jié)參與，其中減輕急性期的神經(jīng)元凋亡與損傷是改善其預(yù)后及其疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵，如何增強(qiáng)缺血性腦組織對(duì)損傷的耐受力是亟待解決的問(wèn)題。有研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子不足將嚴(yán)重限制腦卒中

2、患者3個(gè)月后的感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。目前研究證實(shí)，鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)可以顯著改善急性期神經(jīng)細(xì)胞的病理狀態(tài)，促進(jìn)缺血組織神經(jīng)元的存活和生長(zhǎng)發(fā)育并可以防止其受損凋亡，刺激受損神經(jīng)元分化成熟及再生，并能夠選擇性的作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，顛覆了傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為的NGF僅作用于周圍神經(jīng)的看法。我們的前期臨床研究也證實(shí)，NGF對(duì)康復(fù)治療的腦卒中的患者的日常生活活動(dòng)能力(activitiies of daily living，ADL)及運(yùn)動(dòng)功能有較好的

3、促進(jìn)效應(yīng)，但具體機(jī)制尚不明確。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道尚少。有研究表明，康復(fù)訓(xùn)練能夠促使腦細(xì)胞分泌BDNF等多種營(yíng)養(yǎng)因子，但是對(duì)于康復(fù)訓(xùn)練聯(lián)合NGF對(duì)腦卒中患者的神經(jīng)功能恢復(fù)的生物學(xué)機(jī)制尚不清楚。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)也未見(jiàn)具體相關(guān)報(bào)道。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neurophic factor，BDNF)作為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族其中的一員，具有抵抗細(xì)胞凋亡、增加突觸的可塑性及促神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)，加速神經(jīng)康復(fù)的作用。腦損傷后各種功能障礙的重要

4、原因就是腦缺血后誘發(fā)的多種病理生理改變誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡。防止細(xì)胞凋亡是缺血性腦損傷疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵，Bax是Bcl-2家族的一個(gè)凋亡前體成員，其水平的高低與神經(jīng)元的凋亡密切相關(guān)，Bax能激活Caspase家族級(jí)聯(lián)反應(yīng)進(jìn)而誘導(dǎo)凋亡信號(hào)通路的啟動(dòng)。本課題通過(guò)改良線栓法制作大鼠右側(cè)中動(dòng)脈栓塞(MCAO)腦梗死模型，給予外源性NGF并采用神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

5、(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測(cè)方法觀察康復(fù)訓(xùn)練聯(lián)合NGF對(duì)腦梗死大鼠神經(jīng)行為學(xué)及腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、促凋亡蛋白Bax表達(dá)的影響，探討分析其在缺血后腦損傷中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的生物學(xué)機(jī)制。
　　 目的:
　　 探討康復(fù)訓(xùn)練聯(lián)合NGF對(duì)腦梗死大鼠神經(jīng)行為學(xué)及海馬組織中BDNF和Bax表達(dá)的影響，研究二者在促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)方面是否存

6、在協(xié)同效應(yīng)及其作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、NGF組、康復(fù)訓(xùn)練組及康復(fù)訓(xùn)練聯(lián)合NGF治療組;采用改良線栓法制作大鼠右側(cè)中動(dòng)脈栓塞(MCAO)腦梗死模型，NGF組制模成功后立即給予肌肉注射NGF20μg/（kg·d）;康復(fù)訓(xùn)練組制模成功后72 h給予平衡木、轉(zhuǎn)棒、網(wǎng)屏、滾筒訓(xùn)練;聯(lián)合治療組同時(shí)給予NGF和康復(fù)訓(xùn)練治療。各組分別于術(shù)后7d、14d、21d采用國(guó)際上通用的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)Zea-longa5分制

7、進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分;采用免疫組化法檢測(cè)海馬組織BDNF及Bax蛋白的表達(dá)，RT-PCR法檢測(cè)BDNF mRNA、Bax mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分的比較各個(gè)時(shí)間點(diǎn)康復(fù)訓(xùn)練組、NGF組及聯(lián)合治療組點(diǎn)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯低于對(duì)照組（均P＜0.05);且聯(lián)合治療組明顯低于康復(fù)訓(xùn)練組、NGF組（均P＜0.05)。
　　 2.免疫組化檢測(cè)BDNF、Bax的表達(dá):與對(duì)照組相比，康復(fù)訓(xùn)練組、NGF

8、組及聯(lián)合治療組各時(shí)間點(diǎn)海馬組織BDNF表達(dá)的光密度(optical density, OD)值明顯增加，Bax表達(dá)的OD值明顯降低（均P＜0.05）;與康復(fù)訓(xùn)練組、NGF組相比，聯(lián)合治療組海馬組織BDNF及Bax表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05)。
　　 3.RT-PCR檢測(cè)各組腦組織BDNFmRNA和Bax mRNA表達(dá)的比較與對(duì)照組相比，康復(fù)訓(xùn)練組、NGF組及聯(lián)合治療組各時(shí)間點(diǎn)海馬組織BDNFmRNA累積光密度(Iteg

9、ral Optical Density，IOD)明顯增加，BaxmRNAIOD明顯降低（均P＜0.05）;與康復(fù)訓(xùn)練組、NGF組相比，聯(lián)合治療組海馬組織BDNF mRNA及Bax mRNA IOD表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、康復(fù)訓(xùn)練聯(lián)合NGF可通過(guò)上調(diào)BDNF、下調(diào)Bax的表達(dá)而顯著促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)。
　　 2、康復(fù)訓(xùn)練與NGF二者在促進(jìn)神經(jīng)元存活及阻抑細(xì)胞凋亡方面存在協(xié)