SSTR2逆轉(zhuǎn)EMT影響胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的：探討SSTR2基因?qū)σ认侔┣忠u轉(zhuǎn)移及EMT特性的影響。
　　方法：構(gòu)建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV,分別轉(zhuǎn)染人胰腺癌細胞株P(guān)anc-1,用免疫熒光檢測細胞轉(zhuǎn)染效率,RealTimePCR檢測轉(zhuǎn)染后Panc-1細胞SSTR2的基因水平的表達,WesternBlot檢測轉(zhuǎn)染后Panc-1細胞SSTR2的蛋白水平的表達。采用劃痕實驗、Transwell遷移實驗和Transwell侵襲實驗分別檢測未轉(zhuǎn)

2、染病毒的胰腺癌細胞(空白對照組)、轉(zhuǎn)染3FLAG-puromycin-LV的胰腺癌細胞(陰性對照組)和轉(zhuǎn)染SSTR2-LV的胰腺癌細胞(實驗組)侵襲轉(zhuǎn)移能力的強弱。鏡下觀察轉(zhuǎn)染前后胰腺癌細胞Panc-1形態(tài)的變化,并用免疫熒光檢測轉(zhuǎn)染前后胰腺癌細胞Panc-1上皮表型蛋白E-cadherin和間質(zhì)表型蛋白vimentin定位表達差異,WesternBlot檢測轉(zhuǎn)染前后Panc-1細胞上皮表型蛋白E-cadherin,β-catenin和

3、間質(zhì)表型蛋白N-cadherin,Vimentin定量表達差異。
　　結(jié)果：SSTR2-LV可以有效轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞株panc-1并穩(wěn)定表達SSTR2的mRNA和蛋白,建立了穩(wěn)定表達SSTR2的細胞模型。轉(zhuǎn)染SSTR2-LV的胰腺癌細胞Panc-1較空白對照組和陰性對照組侵襲遷移能力明顯受到抑制(P<0.01),而空白對照組和陰性對照組之間無明顯差異(P>0.05)。鏡下觀察胰腺癌細胞Panc-1細胞轉(zhuǎn)染SSTR2-LV后,由成纖維

4、細胞樣、排列分散,雜亂轉(zhuǎn)變?yōu)榧毎帕芯o密如鋪路石般,且有極性。免疫熒光可見Panc-1轉(zhuǎn)染SSTR2-LV后細胞膜表達的E-cadherin熒光由胞漿轉(zhuǎn)移至細胞周邊濃聚,而Vimentin的熒光強度較前下降。用WesternBlot進行蛋白定量分析,轉(zhuǎn)染SSTR2-LV后胰腺癌細胞Panc-1上皮表型標志性蛋白E-cadherin,β-catenin表達量增高,間質(zhì)表型標志性蛋白N-cadherin,Vimentin表達量減少,較空白對