骨橋蛋白體外誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化中的作用.pdf

1、目的：骨創(chuàng)傷后的再生能力提示有能夠自我復(fù)制并能多向分化的干細(xì)胞存在。一般認(rèn)為，干細(xì)胞存在于骨、骨膜、骨髓及其他由中胚層發(fā)育來的組織中，在出生后仍然有少量干細(xì)胞繼續(xù)存在，在機(jī)體損傷時(shí)參與組織的修復(fù)。組織工程的基礎(chǔ)是有功能的細(xì)胞，骨組織工程需要大量的成骨細(xì)胞。十多年來，國內(nèi)外學(xué)者和臨床工作者對各種組織的細(xì)胞成骨能力進(jìn)行了大量的研究，提出了定向性骨祖細(xì)胞、誘導(dǎo)性骨祖細(xì)胞和基質(zhì)干細(xì)胞的概念。目前，在研究中使用的作為種子細(xì)胞的成骨細(xì)胞來源有以下幾

2、種骨、軟骨、骨外膜、骨髓和骨外組織。越來越多的證據(jù)表明，骨髓基質(zhì)干細(xì)胞有多分化潛能，移植人體內(nèi)后可分化為骨、軟骨、肌肉、脂肪、血管內(nèi)皮、肝臟、神經(jīng)等多種細(xì)胞。能夠作為組織工程中不同細(xì)胞的來源在體內(nèi)正常循環(huán)中能夠分布于多種組織和器官，可以用于細(xì)胞和基因治療。而且取材、分離培養(yǎng)、擴(kuò)增以及導(dǎo)入外源基因也相對方便。通過抽取自體骨髓得到，對病人造成創(chuàng)傷較少，且無免疫排斥反應(yīng)。因此，在實(shí)際應(yīng)用時(shí)將具有潛在的優(yōu)勢。骨橋蛋白在骨形成與骨改建中扮演著重要

3、角色，實(shí)驗(yàn)觀察其是否能誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，探討其在骨折愈合過程中的作用機(jī)制，為其以后在骨折愈合方面的研究提供確切的理論依據(jù)。
　　 方法：沖洗法獲取Weistar大鼠骨髓，用貼壁法分離提純骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，傳至第3代細(xì)胞后分組，體外培養(yǎng)的BMSCs分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組添加含0.2nmol/L骨橋蛋白的DMEM條件培養(yǎng)基；對照組為不含骨橋蛋白的DMEM培養(yǎng)基，于不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞。通過光鏡觀察培養(yǎng)的

4、細(xì)胞形態(tài)，以細(xì)胞計(jì)數(shù)法測定生長曲線，應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期，堿性磷酸酶(ALP)染色和活性測定，骨鈣素(OCN)含量測定。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞具有成骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征；骨橋蛋白組引起細(xì)胞生長曲線右移，細(xì)胞G0/G1期比例平均增加13.17％(P＜0.01)，S期比例減少74.93％(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組ALP染色呈陽性，且ALP活性，OCN含量均較對照組明顯提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：1.貼壁篩選法