馬勃培養(yǎng)特性、總生物堿含量及體外抑菌活性的研究.pdf

1、馬勃是較常用的傳統(tǒng)藥用真菌，廣泛分布于世界各地。中國(guó)藥典(2005年版)收載的馬勃主要為脫皮馬勃(Lasiosphaera fenzlii Reich)，大馬勃[Calvatia gigantean(Batsch ex Pers.)Lloyd]或紫色馬勃[C. lilacina(Mont.et Berk.)Lloyd]的干燥子實(shí)體。 脫皮馬勃具有消腫、解毒和止血的功用，臨床主要用于治療呼吸道感染所引起的咽喉腫痛、扁桃體炎、咳嗽等

2、癥狀，也可外用于治療瘡癰、褥瘡、凍瘡及創(chuàng)傷出血等。褐孢大禿馬勃[C. saccata(Vahl：Fr.)Morg]、黑鉛色灰球菌(Bovista nigrescens Pers.)、大口靜灰球(Bovistella sinensis Lloyd)和灰包菇[Secotium agaricoides(Czern.)Hollos]這四種腹菌綱真菌在我國(guó)部分地區(qū)也被作為馬勃入藥，但尚未被中國(guó)藥典所收載。 據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)記載，褐孢大禿馬勃幼時(shí)

3、可食用；黑鉛色灰球菌的孢子粉可作為傷口藥使用；大口靜灰球和灰包菇與脫皮馬勃具有相同的藥用功效，特別是大口靜灰球在吉林、江蘇、湖北、江西、福建等多個(gè)省市的眾多中醫(yī)門診中被廣泛地作為馬勃入藥，用于治療咳血、創(chuàng)傷出血和扁桃體炎等。 我國(guó)馬勃資源豐富，藥用歷史悠久，民間和臨床使用較廣泛，開發(fā)利用的潛力巨大，值得對(duì)其進(jìn)一步研究與探討。本論文對(duì)鑒定的灰包菇[Secotium agaricoides(czem.)Hollos]，脫皮馬勃(L.

4、fenzlii)，褐孢大禿馬勃[C.saccata(Vahl：Fr.)Morg]，大口靜灰球(Bovistella sinensis Lloyd)和黑鉛色灰球菌(Bovista nigrescens Pers.)5種馬勃的菌絲體培養(yǎng)特性及體外抑菌活性進(jìn)行研究，并對(duì)大口靜灰球子實(shí)體的總生物堿進(jìn)行提取和含量測(cè)定，以期為馬勃的優(yōu)質(zhì)培育與資源開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)采用固體培養(yǎng)方法分別研究單因子碳源、氮源、維生素、pH值、溫

5、度和光照對(duì)以上5種馬勃菌絲體固體培養(yǎng)特性的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別篩選出適合以上5種馬勃生長(zhǎng)的最佳營(yíng)養(yǎng)成分和最佳培養(yǎng)條件，根據(jù)單因子實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)L16(45)，篩選出適合灰包菇和大口靜灰球菌絲體生長(zhǎng)的最佳培養(yǎng)基配方；另外采用液體培養(yǎng)方法對(duì)5種馬勃液體培養(yǎng)基中碳源、氮源、初始pH值，液體接種量和培養(yǎng)條件進(jìn)行研究，篩選出適合5種馬勃液體發(fā)酵的最佳營(yíng)養(yǎng)成分和最佳培養(yǎng)條件，從而為5種馬勃菌種的優(yōu)質(zhì)培育和實(shí)現(xiàn)其人工栽培提供理論依據(jù)。 對(duì)

6、大口靜灰球總生物堿的提取方法進(jìn)行比較研究，采用酸水提取法提取大口靜灰球子實(shí)體并收集酸水提取液，經(jīng)732型陽(yáng)離子交換樹脂吸附總生物堿后，使用732型陽(yáng)離子交換樹脂柱洗脫純化法、靜置提取純化法、熱回流提取純化法和索氏提取純化法該樹脂進(jìn)行洗脫純化，獲得較純的總生物堿，通過(guò)稱重法和酸性染料比色法對(duì)不同提取方法獲得的總生物堿含量進(jìn)行測(cè)定。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，使用732型陽(yáng)離子交換樹脂柱洗脫純化法獲得的總生物堿最多，總生物堿含量達(dá)2.68％，其

7、次依次是熱回流提取純化法獲得1.13％、索氏提取純化法獲得0.52％和靜置提取純化法獲得0.47％。此外，采用二苯碳酰二肼分光光度法對(duì)脫皮馬勃孢子粉水提液中Cr6+的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示其中Cr6+含量為0.1206～0.2956mg/L。 采用菌餅法(活菌活性測(cè)定)和紙片擴(kuò)散法研究了5種馬勃的發(fā)酵液、菌絲體水提液、活菌菌餅以及大口靜灰球子實(shí)體6種溶劑提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、黑曲霉和綠色木霉5種測(cè)