FOXE1和RASSF2甲基化異常在甲狀腺乳頭狀癌中的研究.pdf

1、第一部分：FOXE1和RASSF2基因甲基化在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株中功能研究
　　 為了研究FOXE1和RASSF2兩個(gè)基因啟動(dòng)子區(qū)域在甲狀腺乳頭狀癌中甲基化狀態(tài)是否異常，以及其表達(dá)水平是否受到甲基化調(diào)控，培養(yǎng)正常甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞株Nthy-ori-3以及三株甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株W3，IHH4，TPC1。提取DNA并做NaHSO3處理，選擇FOXE1和RASSF2啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)行PCR，并克隆測序。結(jié)果提示，與結(jié)果提示對(duì)比正常甲

2、狀腺濾泡上皮細(xì)胞株，在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株中FOXE1啟動(dòng)子區(qū)域呈現(xiàn)低甲基化，F(xiàn)OXE1高表達(dá)狀態(tài)。而RASSF2啟動(dòng)子區(qū)域呈現(xiàn)高甲基化，RASSF2低表達(dá)狀態(tài)。針對(duì)以上結(jié)果，用5-aza-dC處理甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株，去除甲基化狀態(tài)，檢測原本啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化的RASSF2基因，結(jié)果表明，RASSF2啟動(dòng)子區(qū)域去甲基化以后，RASSF2表達(dá)上調(diào)。以上結(jié)果表明，F(xiàn)OXE1和RASSF2啟動(dòng)子區(qū)域在甲狀腺乳頭狀癌中都有異常甲基化狀態(tài)，并且

3、分別表現(xiàn)出類似癌基因和抑癌基因的作用。
　　 第二部分：FOXE1和RASSF2基因甲基化在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤樣本中研究
　　 為了進(jìn)一步研究FOXE1和RASSF2基因啟動(dòng)子區(qū)域在臨床樣本中的甲基化狀態(tài)，本研究采用79例甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本，以及匹配的癌旁組織。針對(duì)。FOXE1和RASSF2在細(xì)胞株中甲基化異常位點(diǎn)設(shè)計(jì)MSP引物，進(jìn)行甲基化狀態(tài)檢測。并且結(jié)合臨床特點(diǎn)以及BRAF突變檢測，對(duì)其危險(xiǎn)因素和甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析。

4、結(jié)果顯示，F(xiàn)OXE1在甲狀腺乳頭狀癌和癌旁的甲基化比率分別為5.06％和16.46％(P=0.040)，在腫瘤中FOXE1 mRNA表達(dá)明顯高于癌旁(P＜0.001)。比較臨床特點(diǎn)發(fā)現(xiàn)甲基化狀態(tài)和橋本氏甲狀腺炎(P=0.003)，T腫瘤分級(jí)(P＜0.001)以及包膜是否侵犯(P＜0.001)相關(guān)。在RASSF2基因在甲狀腺乳頭狀癌和癌旁之間的甲基化率分比為53.16％和10.13％(P＜0.001)，在腫瘤中。RASSF2表達(dá)明顯低于癌

5、旁(P＜0.001)，在對(duì)比分析臨床特點(diǎn)后發(fā)現(xiàn)頸部Ⅵ區(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和RASSF2甲基化狀態(tài)有密切聯(lián)系(P=0.004)。
　　 同時(shí)檢測BRAF突變和腫瘤T分級(jí)(P=0.007)，包膜外侵犯(P=0.005)有密切聯(lián)系，而。BRAF突變和FOXE1(P=0.051)，RASSF2(P=0.447)甲基化狀態(tài)都沒有密切關(guān)聯(lián)。結(jié)果提示，在甲狀腺乳頭狀癌中，F(xiàn)OXE1和RASSF2啟動(dòng)子甲基化有明顯異常，在甲狀腺癌腫瘤形成機(jī)制中起到了重