不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者分泌中期子宮內(nèi)膜VEGF和PR的表達(dá).pdf

1、背景:
　　復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion,RSA）是最常見的妊娠并發(fā)癥之一，發(fā)病率為0.5％-2.0%。引起RSA的病因有染色體異常、生殖道解剖學(xué)異常、內(nèi)分泌異常、感染因素、自身免疫異常、環(huán)境因素等。但是仍有50%的RSA原因不明。近年來研究發(fā)現(xiàn)不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)與母-胎界面免疫耐受異常、遺

2、傳性易栓癥、基因多態(tài)性等相關(guān)。URSA的病因非常復(fù)雜，可能為單因素或多因素，其確切病理機(jī)制尚不明了。因此多方向研究為闡明URSA系統(tǒng)的病理機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　子宮內(nèi)膜受到蛻膜化變應(yīng)原的刺激發(fā)生蛻膜化。蛻膜對(duì)胚胎的著床、妊娠的建立與維持，以及分娩的發(fā)動(dòng)均起著極為重要的作用。子宮內(nèi)膜蛻膜化包括子宮腺體的內(nèi)分泌改變、基質(zhì)細(xì)胞的分化、子宮自然殺傷細(xì)胞巨噬細(xì)胞的積聚及血管的再生。子宮內(nèi)膜通過蛻膜化反應(yīng)抑制炎癥因子的產(chǎn)生和氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而保

3、護(hù)妊娠。子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞（endometrium stromal cell,ESC）的分化是由孕酮誘導(dǎo)的，在分泌中晚期受蛻膜化誘導(dǎo)因子刺激，分化成蛻膜。ESC含有攜帶cAMP的孕酮和E2，蛻膜的分化是靠孕酮和cAMP信號(hào)路徑共同完成的。孕酮主要是通過靶細(xì)胞PR受體(progesterone receptor,PR)結(jié)合，激活轉(zhuǎn)錄因子，使子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞在分泌期發(fā)生蛻膜化。PR調(diào)控蛻膜化的作用機(jī)理不是很明了，現(xiàn)有的研究證據(jù)表明，子宮內(nèi)膜局

4、部因子和cAMP第二信使途徑的激活，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子（這些因子包括FOXO1、STAT5、C/EBPb）的表達(dá)或激活，來調(diào)節(jié)PR的功能。因此PR在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)影響著內(nèi)膜的蛻膜化。
　　血管的再生由血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)介導(dǎo)。VEGF是一種作用于血管內(nèi)皮的細(xì)胞因子，與受體Flt-1、Klk-1、Flt-4結(jié)合引起受體磷酸化，進(jìn)而與磷脂酶C結(jié)合，進(jìn)一步激活磷脂

5、酶C-蛋白激酶A傳導(dǎo)通路，通過信號(hào)傳導(dǎo)，誘導(dǎo)微血管形成，增加血管通透性。VEGF參與子宮內(nèi)膜蛻膜化過程中的血管再生，并參與妊娠胎盤的形成及滋養(yǎng)葉細(xì)胞的侵襲。
　　此外，在月經(jīng)周期中，分泌中期子宮內(nèi)膜表達(dá)的細(xì)胞因子mRNA與妊娠期子宮內(nèi)膜最為相似。研究表明早期胚胎發(fā)育異常的患者種植窗期子宮內(nèi)膜細(xì)胞因子表達(dá)異常，如RSA患者種植窗期子宮內(nèi)膜IL-1及IL-6表達(dá)異常。子宮內(nèi)膜容受性異?？赡茉斐膳咛プ钤缙诎l(fā)育障礙，胚胎雖然可以著床，但不

6、能繼續(xù)發(fā)育，造成流產(chǎn)。有學(xué)者提出RSA的大部分患者存在子宮內(nèi)膜容受性缺陷，但是少有研究RSA患者分泌中期子宮內(nèi)膜因子的表達(dá)與流產(chǎn)的關(guān)系。
　　綜上所述分泌中期子宮內(nèi)膜的VEGF和PR的表達(dá)影響著妊娠結(jié)局。
　　目的:
　　通過檢測URSA患者（研究組）和因輸卵管間質(zhì)部梗阻行IVF的婦女（對(duì)照組）分泌中期子宮內(nèi)膜VEGF和PR的mRNA和蛋白表達(dá)水平，并比較兩組人群的表達(dá)差異，初步探討子宮內(nèi)膜分泌中期VEGF、PR的表達(dá)

7、水平與URSA的關(guān)系，為闡明URSA發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、研究對(duì)象
　　2010年6月至2011年12月在廣州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心和廣東省婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心及產(chǎn)前診斷科就診的22例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者（研究組），年齡22~34歲，平均年齡（26.94±2.75）歲，及同期20例在廣州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院和廣東省婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心因輸卵管間質(zhì)部梗阻行IVF的婦女（對(duì)照組），年齡24~3

8、5歲，平均年齡（28.53±3.68）歲。
　　2、實(shí)驗(yàn)方法
　　(1)所有內(nèi)膜組織經(jīng)HE染色，進(jìn)行組織學(xué)分期，同時(shí)判斷有無炎性細(xì)胞浸潤。
　　(2)比較兩組患者月經(jīng)第3-5天的激素（FSH、LH、E2、PRL、T）水平，及黃體中期（排卵后6-9天）P水平。
　　(3)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測兩組患者子宮內(nèi)膜VEGF和PR的mRNA表達(dá)水平，比較兩組患者表達(dá)水平的差異。
　　(4)采用免疫組化方法檢測檢測

9、兩組子宮內(nèi)膜VEGF和PR的蛋白表達(dá)水平，比較兩組患者表達(dá)水平差異。
　　結(jié)果:
　　1、研究組和對(duì)照組病例共42例，均顯示分泌中期內(nèi)膜，研究組中6例有漿細(xì)胞浸潤，對(duì)照組中未發(fā)現(xiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤。
　　2、研究組與對(duì)照組患者的FSH（7.44±1.50 VS7.20±1.20）U/L、LH(5.70±2.64 VS5.10±2.10) U/L、E2（51.30±36.55 VS45.31±21.46）pg/ml、PRL

10、(20.37±10.79 VS19.82±12.51)ng/ml、T(2.14±0.71 VS2.09±0.68)nmol/l、P(35.5±4.03 VS37.22±3.72)nmol/l的值比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　3、VEGF和PR的mRNA在42例患者子宮內(nèi)膜中均有表達(dá)。但結(jié)果顯示研究組VEGF的mRNA表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）；研究組PR的mRNA表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有

11、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。
　　4、VEGF和PR蛋白在42例患者子內(nèi)膜中均有表達(dá)。VEGF主要表達(dá)于腺上皮和腔上皮，間質(zhì)有少量表達(dá)，定位于胞漿，PR主要表達(dá)于間質(zhì)，在腺上皮也有少量表達(dá)，定位于細(xì)胞核。VEGF的蛋白半定量表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.037)，研究組PR的蛋白半定量表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。
　　結(jié)論:
　　1、基礎(chǔ)激素水平與URSA不相關(guān)。