黃芩苷、苦參堿、小檗堿對NASH大鼠的治療作用及對L-FABP的影響與機(jī)制研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一種遺傳一環(huán)境一代謝應(yīng)激相關(guān)性疾病，它可以進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化甚至肝癌等終末期肝病的疾病。其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，一般認(rèn)為氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化損傷是促進(jìn)脂肪變的肝臟發(fā)生炎癥、壞死和纖維化的關(guān)鍵因素。因此，臨床上應(yīng)以氧化應(yīng)激作為靶點(diǎn)來研究和開發(fā)治療NASH的藥物，但今尚無確切療效的藥物。一些傳統(tǒng)的中藥單體在治療氧化應(yīng)激相關(guān)性疾病方面表現(xiàn)出令人驚異的治療效果。黃芩苷(BA)、苦參堿(MT)、小檗堿均(B

2、E)作為其中的佼佼者，具有抗炎、抗氧化、抗纖維化、調(diào)節(jié)免疫機(jī)能等作用。近年發(fā)現(xiàn)肝型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)是一種有效的內(nèi)源性抗氧化物，有望被開發(fā)成抗氧化應(yīng)激的新靶點(diǎn)。本研究旨在通過建立動物模型觀察黃芩苷、苦參堿、小檗堿治療NASH的療效并研究三種中藥單體對L-FABP的影響；通過體外氧化應(yīng)激模型進(jìn)一步探討黃芩苷、苦參堿、小檗堿對L-FABP作用及其可能分子機(jī)制。研究方法及結(jié)果如下：
　　 1、動物實(shí)驗(yàn)
　　 建立高

3、脂誘導(dǎo)NASH大鼠模型，給予BA30mg/kg/d，MT36mg/kg/d，BE18mg/kg/d灌胃治療3周，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)上述三種中藥單體治療后能減輕NASH大鼠的體重，但對肝重?zé)o影響。肝組織病理學(xué)顯示三種中藥單體能緩解肝細(xì)胞脂肪變性，改善炎性細(xì)胞浸潤、灶狀壞死和肝細(xì)胞氣球樣變。血清ALT、AST降低；肝組織SGH、SOD活性升高，MDA減少。Realtime PCR檢測發(fā)現(xiàn)BA、MT、BE對大鼠肝組織中L-FABP mRNA表達(dá)無影響

4、。Western blotting檢測發(fā)現(xiàn)BA、MT能升高大鼠肝組織L-FABP蛋白水平，而BE對L-FABP蛋白水平無影響。
　　 2、體外實(shí)驗(yàn)
　　 建立H2O2誘導(dǎo)活性氧(ROS)產(chǎn)生的氧化應(yīng)激體外模型，構(gòu)建過表達(dá)L-FABP質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染至Chang肝細(xì)胞，流式細(xì)胞技術(shù)檢測過表達(dá)L-FABP后，細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯減少。MTT法篩選出120μmol/L以下的BA、67.8μmol以下的MT、78.2μmol/L以下

5、的BE持續(xù)作用48h內(nèi)為安全有效濃度。流式細(xì)胞技術(shù)和Confocal觀察細(xì)胞內(nèi)ROS含量，證實(shí)50μmol BA、32μmol MT、50μmol BE持續(xù)作用48h后減少ROS含量效果最為明顯。檢測肝細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH、CAT的活性，發(fā)現(xiàn)50μmol BA、32μmol MT、50μmol BE持續(xù)作用48h后能增加細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的活性，減少LDH的產(chǎn)生，但對CAT的活性沒有影響。Realtime-PCR檢測顯示BA、MT、B

6、E不能影響L-FABP mRNA的表達(dá)，但BA、MT能升高L-FABP蛋白的水平，而BE對體內(nèi)L-FABP蛋白水平無影響。隨后分別加入蛋白質(zhì)合成抑制劑放線菌酮(CHX)和蛋白酶體降解抑制劑MG132，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入CHX繼續(xù)培養(yǎng)后L-FABP蛋白水平降低，而MG132處理后L-FABP蛋白水平增加明顯。
　　 結(jié)論：以上研究結(jié)果顯示黃芩苷、苦參堿、小檗堿對NASH大鼠有顯著治療作用。黃芩苷、苦參堿可能通過增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH的