葡萄渣中反式白藜蘆醇的提取純化及其清除自由基能力的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以生產(chǎn)葡萄酒后的副產(chǎn)物--葡萄渣為原料，從中提取具有多種生理功能的反式白藜蘆醇。對(duì)反式白藜蘆醇的提取條件、純化方法和清除自由基能力進(jìn)行了研究，為葡萄渣的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。 反式白藜蘆醇的檢測(cè)方法采用紫外分光光度法和高效液相色譜法。采用紫外分光光度法測(cè)定時(shí)，確定出最佳吸收波長為306nm，并得出了標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=0.1122x-0.0132(R2=0.9991)，濃度范圍為0～8μg/mL；采用高效液相色譜法測(cè)

2、定時(shí)，所用的色譜條件是：流動(dòng)相為甲醇-水溶液(50:50，v/v)、流速為0.8mL/min、進(jìn)樣量為10μL、柱溫為室溫，所得到的反式白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖峰形比較好，且所得出的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=60297x-10418(R2=0.9997)。反式白藜蘆醇濃度在0.5μg/mL～20～g/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為0.5μg/mL。 采用80％甲醇、80％乙醇、80％丙酮和乙酸乙酯等有機(jī)溶劑對(duì)葡萄渣進(jìn)行

3、了提取，結(jié)果表明80％乙醇對(duì)反式白藜蘆醇的提取效果比較好。 在對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化的過程中，采用了三因素三水平的響應(yīng)面分析方法。最佳提取條件結(jié)果為：溫度69℃、時(shí)間61min、液固比46mL/g，其理論最大提取含量為104.39μg/g，經(jīng)過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)所得到的實(shí)際提取含量為103.86μg/g。各因素影響程度從大到小依次排列為液固比＞提取時(shí)間＞提取溫度。 采用大孔吸附樹脂法和堿提酸沉法對(duì)反式白藜蘆醇進(jìn)行了純化工藝的研究。大孔

4、吸附樹脂法中選擇了用AB-8樹脂來分離純化，其在4h左右基本完成對(duì)反式白藜蘆醇的吸附；當(dāng)反式白藜蘆醇的濃度為70.6μg/mL，時(shí)，AB-8樹脂的吸附效果好；對(duì)吸附后的AB-8樹脂采用75％的乙醇溶液、以流速0.75BV/h進(jìn)行解吸，大約需消耗5.5BV左右的解吸劑就基本能把反式白藜蘆醇解吸出來；所得到的反式白藜蘆醇初產(chǎn)品純度為26.32％。堿提酸沉法中最后采用pH=12的NaOH溶液進(jìn)行提取，并用HCl溶液調(diào)整到溶液pH=3。最終產(chǎn)品