羅格列酮下調(diào)人肺腺癌A549細(xì)胞VEGF表達(dá)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討過氧化物酶體增殖因子活化受體（proliferator-adtivated receptor gammar PPARγ）配體羅格列酮（Rosiglitazone RSG）對(duì)肺腺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor VEGF)表達(dá)的調(diào)節(jié)作用,揭示RSG抑制肺腺癌血管生成的機(jī)制。旨在為肺腺癌抗腫瘤血管治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞株A549,不同

2、濃度RSG孵育24h后,采用兩步非生物素免疫組化（PV）法檢測(cè)用藥前后A549細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)用藥前后A549細(xì)胞PPARγ、VEGFmRNA表達(dá)。 結(jié)果： 免疫組化結(jié)果顯示A549細(xì)胞存在VEGF蛋白表達(dá)。如圖所見，VEGF蛋白陽性信號(hào)主要見于A549細(xì)胞核膜周圍和胞質(zhì)內(nèi)，與對(duì)照組比較，1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG組VEGF蛋白陽性信號(hào)減

3、弱，未見表達(dá)位置改變。對(duì)照組、1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG組積分光密度（Integrated optical density IOD）分別為2602.45±149.27、2381.32±151.16、1794.18±142.25、938.26±121.32、645.43±136.11、861.31±124.17、2574.64±154.21。10μmol.L-1RSG組IOD為645.43±136.

4、11，表達(dá)較對(duì)照組IOD 2602.45±149.27明顯減少（P＜0.01.n=6），10μmol.L-1RSG組VEGF蛋白陽性信號(hào)減弱最強(qiáng)，≥20μmol.L-1RSG組陽性信號(hào)減弱減少，100μmol.L-1RSG組VEGF蛋白陽性信號(hào)減弱不明顯，其VEGF蛋白陽性信號(hào)與對(duì)照組比較表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05.n=6）。100ng.ml-1TNP-470組IOD為957.21±148.12，10μmol.L-1RSG組（645

5、.43±136.11）較100ng.ml-1TNP-470組（957.21±148.12）VEGF陽性信號(hào)減弱明顯,GW9662阻斷后的10μmol.L-1RSG組的IOD為1302.53±154.34，對(duì)VEGF信號(hào)抑制作用減弱（P＜0.01，n=6）。 RT-PCR結(jié)果顯示A549細(xì)胞存在PPARγmRNA表達(dá)，且≥2.5μmol.L-1RSG呈濃度依賴方式上調(diào)PPARγmRNA的表達(dá)（P＜0.01或p＜0.05.n=6）。

6、對(duì)照組、1.25、2.5、5.0、10、20、100μmol.L-1RSG組PPARγmRNA表達(dá)的相對(duì)灰度值％分別為：78.71±5.67、79.75±6.45、90.29±4.87、90.50±5.07、103.22±7.52、119.65±9.32、148.51±11.27；RT-PCR結(jié)果也顯示A549細(xì)胞存在VFGEmRNA表達(dá)。與對(duì)照組比較，RSG組VEGFmRNA表達(dá)明顯下調(diào)。對(duì)照組、1.25、2.5、5.0、10、20、

7、100μmol.L-1RSG組VEGFmRNA表達(dá)的相對(duì)灰度值％分別為：99.16±13.23、68.82±9.49、56.53±3.53、48.57±2.95、16.74±0.93、49.56±4.97、75.63±5.45?？梢?.25μmol.L-1 RSG組VEGFmRNA表達(dá)已明顯下調(diào)，10μmol.L-1RSG組下調(diào)作用最強(qiáng)，≥20μmol.L-1RSG組下調(diào)作用減弱，100μmol.L-1RSG組下調(diào)作用不明顯，與對(duì)照組比

8、較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05 n=6）；并且10μmol.L-1RSG組（16.74±0.93）較100ng.ml-1TNP-470組（37.69±5.94）下調(diào)VEGF作用更明顯（P＜0.01.n=6），PPARγ阻斷劑GW9662組（41.63±1.43）明顯拮抗RSG下調(diào)VEGF的作用(P<0.01 n=6)。 結(jié)論： 1.人肺腺癌A549細(xì)胞存在PPARγ和VEGF的表達(dá)。 2.羅格列酮呈濃度依賴方式上調(diào)