葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78對肝癌細(xì)胞增殖、自噬及體外血管生成的影響.pdf

1、目的：
　　本研究旨在探討GRP78siRNA干擾GRP78表達(dá)對體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞株增殖、自噬和體外血管生成的影響及其作用機(jī)制，為探索有效抗腫瘤和抗腫瘤血管生成藥物提供新靶點(diǎn)與新思路。
　　方法：
　　1. GRP78最佳 siRNA篩選：設(shè)計(jì)合成 siRNA轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞株MHCC97H，通過Western blot分析篩選出最佳干擾片段；
　　2.實(shí)驗(yàn)分三組，即空白對照組（control group）

2、，陰性對照組（siControl group）和實(shí)驗(yàn)組（siGRP78 group）；
　　3. MTT法檢測下調(diào)GRP78表達(dá)后肝癌細(xì)胞增殖活力變化；
　　4.流式細(xì)胞儀檢測下調(diào) GRP78表達(dá)后對肝癌細(xì)胞株 huh7和SMMC7721細(xì)胞周期分布的影響；
　　5. Western blot分析下調(diào)肝癌細(xì)胞GRP78表達(dá)后各組LC3-Ⅱ、CCND1、AKT、p-AKT蛋白表達(dá)變化；
　　6.收集轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞培養(yǎng)

3、基上清行體外血管生成實(shí)驗(yàn)：HUEVC平板克隆形成和劃痕遷移檢測GRP78對腫瘤微環(huán)境中血管生成的影響。
　　結(jié)果：
　　1. GRP78siRNA特異性下調(diào)肝癌細(xì)胞GRP78表達(dá)；
　　2.下調(diào)GRP78表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞增殖；
　　3.下調(diào)GRP78表達(dá)可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞阻滯在G0/G1期；
　　4.下調(diào)GRP78表達(dá)可顯著降低肝癌細(xì)胞周期蛋白CCND1的表達(dá)；
　　5.下調(diào)GRP78表達(dá)可顯著降低肝癌

4、細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白LC3-Ⅱ的表達(dá)；
　　6.下調(diào)GRP78表達(dá)可顯著降低肝癌細(xì)胞AKT磷酸化水平；
　　7.下調(diào)GRP78表達(dá)可顯著抑制體外血管生成：HUEVC平板克隆形成和劃痕遷移。
　　結(jié)論：
　　1.GRP78siRNA轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞能夠特異性下調(diào) GRP78表達(dá)，并抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)huh7和SMMC7721細(xì)胞周期阻滯；
　　2.下調(diào)huh7和SMMC7721細(xì)胞GRP78后可能通過影響PI3K/A