TGF-β1、β3及其受體βRⅠ、βRⅡ mRNA及蛋白在子宮肌瘤組織中的表達(dá).pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文TGF-β1、β3及其受體βRⅠ、βRⅡ mRNA及蛋白在子宮肌瘤組織中的表達(dá)姓名：白會(huì)敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：王惠蘭;陳素琴2002.3.1中文摘要7 分鐘，滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。②以胃蛋白酶，3 7 ℃，消化3 0 分鐘，暴露m R N A 核酸片段。③進(jìn)行預(yù)雜交( 預(yù)雜交液中不含探針) ，濕盒中3 7 ℃4 小時(shí)。④雜交——T G F —B 1 、B 3 探針采用多相寡核苷酸探針，以地高

2、辛3 l 尾段隨機(jī)引物標(biāo)記方法進(jìn)行標(biāo)記。雜交后，將原位雜交專(zhuān)用蓋玻片蓋在切片上，恒溫箱4 0 —4 2 ℃過(guò)夜。⑤雜交后的洗滌：揭掉蓋玻片，3 0 一3 7 ℃左右水溫的2 x S S C 洗滌5 分鐘×2 次；0 ．5 x S S C洗滌1 5 分鐘X 1 次；0 ．2 x S S C 洗滌1 5 分鐘×2 。⑥滴加封閉液：3 7 ℃3 0 分鐘。⑦滴加生物素化鼠抗地高辛：2 0 ℃左右1 2 0 分鐘。⑧滴加S

3、A B C ：2 0 ℃左右3 0 分鐘。滴加生物素化過(guò)氧化物酶：2 0 ℃左右3 0 分鐘。@ D A B 顯色，蘇木素輕度復(fù)染，封片后顯微鏡下觀察。( 2 ) 免疫組織化學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法是應(yīng)用S A B C 方法檢測(cè)子宮肌瘤瘤邊、瘤心和健康肌組織中T G F - B 1 、B 3 、6 R I 、B R I I 的表達(dá)及分布情況。具體步驟如下：①石蠟切片脫蠟至水后，3 ％雙氧水孵育7 分鐘，滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。②T G F _ B

4、l 、B 3 采用微波修復(fù)抗原；T G F - B R I 、B R I I 采用酶消化處理：滴加復(fù)合消化液1 0 分鐘。③滴加抗原修復(fù)液I ( 用于微波修復(fù)后) ，室溫1 0 分鐘。④正常山羊血清封閉，3 7 ℃孵育3 0 分鐘。⑤滴加一抗4 “ C 冰箱過(guò)夜。⑥滴加生物素化山羊抗兔二抗，3 7 “ C 孵育3 0 分鐘。⑦S A B C ，3 7 ℃孵育3 0 分鐘。@ D A B 顯色，蘇木素輕度復(fù)染，封片后鏡下觀察。結(jié)果：( 1