甘草黃酮及皂苷類成分譜效關(guān)系研究.pdf

1、目的：采用大孔吸附樹脂聯(lián)合聚酰胺柱層析技術(shù)富集甘草黃酮及皂苷類成分，并結(jié)合HPLC法建立不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分指紋圖譜，利用灰色關(guān)聯(lián)分析法對甘草黃酮及皂苷類成分進行譜效關(guān)系研究，確定甘草黃酮各色譜峰代表的化學成分信息與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)程度及甘草皂苷各色譜峰代表的化學信息與鎮(zhèn)咳、保肝作用的關(guān)聯(lián)程度，最終確定可能與藥效相關(guān)的有效成分，為甘草藥材質(zhì)量控制提升提供規(guī)律性的科學依據(jù)，也為其廣泛栽培及種植提供一定的實驗數(shù)據(jù)。
　　方法：<

2、br>　　1.通過大孔吸附樹脂聯(lián)合聚酰胺柱層析技術(shù)分別對新疆、內(nèi)蒙等十個不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分進行富集，得到10個不同產(chǎn)地甘草藥材的黃酮、皂苷類成分富集部位。
　　2.HPLC/DAD法建立10個不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分指紋圖譜，運用“中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)軟件”進行甘草黃酮及皂苷類成分指紋圖譜相似度評價。
　　3.富集部位藥效學研究：(1)采用氨水引咳法進行實驗研究，通過記錄咳嗽潛伏期和2 min內(nèi)咳嗽次

3、數(shù)來評價甘草黃酮及皂苷類成分的鎮(zhèn)咳作用；(2)采用四氯化碳致小鼠肝損傷實驗，測定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的酶活力來綜合評價甘草皂苷類成分的保肝作用。
　　4.運用灰色關(guān)聯(lián)分析法研究甘草黃酮及皂苷類成分的指紋圖譜特征峰所代表的化學成分信息與鎮(zhèn)咳及保肝藥效的關(guān)系，最終根據(jù)關(guān)聯(lián)度大小來確定指紋圖譜特征峰所代表的化學成分對其藥效作用的貢獻程度。
　　結(jié)果：
　　1.10個不同產(chǎn)地的甘草藥

4、材經(jīng)AB-8大孔吸附樹脂及聚酰胺柱層析技術(shù)富集后得到甘草黃酮類成分浸膏，它們分別為寧夏固原市原州區(qū)7.20 g、新疆11.60 g、寧夏吳忠市紅寺堡區(qū)8.40 g、甘肅8.20 g、寧夏鹽池縣發(fā)電站10.90 g、甘肅省慶陽市4.80 g、寧夏鹽池縣藥材基地7.00 g、陜西綏德縣12.00 g、內(nèi)蒙8.20 g、寧夏石嘴山市6.80 g；浸膏得率分別是3.60％、5.80%、4.20%、4.10%、5.45%、2.40%、3.50%、

5、6.60%、4.10%、3.40%；10個不同產(chǎn)地的甘草藥材經(jīng)D101大孔吸附樹脂富集得到甘草皂苷類成分浸膏，它們分別為寧夏吳忠市紅寺堡區(qū)7.50 g、陜西綏德縣8.80 g、寧夏隆德縣7.50 g、新疆6.20 g、甘肅省慶陽市6.80 g、內(nèi)蒙7.20 g、寧夏石嘴山市5.00 g、寧夏固原市原州區(qū)6.80 g、寧夏鹽池縣6.30 g、寧夏市售（具體產(chǎn)地不詳）5.40 g；浸膏得率分別是15.00%、17.60%、15.00%、12

6、.40%、13.60%、14.40%、10.00%、13.60%、12.60%、10.80%。
　　2.建立了10個不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分的指紋圖譜，通過“中藥色譜指紋圖譜相似性評價系統(tǒng)軟件”對甘草黃酮及皂苷類成分指紋圖譜進行相似度評價，確定了甘草黃酮指紋圖譜中的11個共有峰，其保留時間在11.550 min的是芹糖甘草苷；保留時間在12.919 min的是甘草苷；保留時間在34.837 min的是芹糖異甘草苷；保留時間在4

7、4.512 min的是甘草素；保留時間在80.844 min的是異甘草素；確定了甘草皂苷指紋圖譜中的13個共有峰，其保留時間在37.355 min的是甘草酸；保留時間在74.370 min的是甘草次酸。
　　3.氨水引咳實驗中，與空白組比較，陽性對照組、10個不同產(chǎn)地甘草黃酮及甘草類成分均能明顯延長小鼠咳嗽潛伏期、降低2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)(P<0.05,P<0.01)，表明甘草黃酮及皂苷類成分對氨水引起的咳嗽有一定的抑制作用；小鼠

8、致肝損傷實驗中，與模型組比較，陽性對照組及10個不同產(chǎn)地甘草皂苷類成分均能降低四氯化碳致肝損傷的引起的AST、ALT升高(P<0.05，P<0.01)，說明甘草皂苷類成分對四氯化碳致小鼠肝損傷具有一定的保護作用。
　　4.采用灰色關(guān)聯(lián)分析法對指紋圖譜及藥效學數(shù)據(jù)進行處理分析，結(jié)果如下：(1)甘草黃酮指紋圖譜中有10個特征峰與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)度大于0.6，其中有5個特征峰與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)度大于0.8，且關(guān)聯(lián)度大于0.8的物質(zhì)的順序為保

9、留時間為36.823 min的物質(zhì)>保留時間為41.845 min的物質(zhì)>芹糖異甘草苷>保留時間為24.266 min的物質(zhì)>甘草苷；(2)甘草皂苷指紋圖譜中有12個特征峰與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)度大于0.6，其中有2個特征峰與鎮(zhèn)咳作用的關(guān)聯(lián)度大于0.8，且關(guān)聯(lián)度大于0.8的物質(zhì)的順序為甘草酸>保留時間為38.102 min的物質(zhì)；(3)甘草皂苷指紋圖譜中有12個特征峰與血清中AST酶活力作用的關(guān)聯(lián)度大于0.6，其中有3個特征峰與血清中AST酶

10、活力作用的關(guān)聯(lián)度大于0.8，且關(guān)聯(lián)度大于0.8的物質(zhì)的順序為保留時間為38.102 min的物質(zhì)>保留時間為72.643 min的物質(zhì)>保留時間為11.935 min的物質(zhì)；有11個特征峰與血清中ALT酶活力作用的關(guān)聯(lián)度大于0.6，有4個特征峰與血清中ALT酶活力作用的關(guān)聯(lián)度大于0.8，且關(guān)聯(lián)度大于0.8的物質(zhì)的順序為保留時間為38.102 min的物質(zhì)>保留時間為72.643 min的物質(zhì)>保留時間為11.935 min的物質(zhì)>甘草酸

11、。
　　結(jié)論：
　　1.本實驗通過AB-8、D101大孔吸附樹脂及聚酰胺柱層析技術(shù)有效地對甘草黃酮及皂苷類成分進行富集，該方法簡便易行，結(jié)果可靠。
　　2.采用HPLC法對10個不同產(chǎn)地甘草黃酮及皂苷類成分進行指紋圖譜測定，甘草黃酮指紋圖譜中有11個共有特征峰，甘草皂苷指紋圖譜中有13個共有特征峰，經(jīng)過考察，該方法精密度、穩(wěn)定性、重復性均較好，為甘草藥材的質(zhì)量控制標準提供了參考。
　　3.藥效學實驗結(jié)果得出不同產(chǎn)

12、地甘草黃酮類成分具有不同程度的鎮(zhèn)咳作用；甘草皂苷類成分也有一定的鎮(zhèn)咳及保肝作用。
　　4.采用灰色關(guān)聯(lián)分析法對指紋圖譜及藥效學數(shù)據(jù)處理分析，結(jié)果如下：(1)甘草黃酮中有10個特征峰與鎮(zhèn)咳作用有關(guān)聯(lián)度，其中5個特征峰與鎮(zhèn)咳作用高度關(guān)聯(lián)；(2)甘草皂苷中有12個特征峰與鎮(zhèn)咳作用有關(guān)聯(lián)度，其中2個特征峰與鎮(zhèn)咳作用高度關(guān)聯(lián)；有12個特征峰與血清中AST酶活力有關(guān)聯(lián)度，其中3個特征峰與血清中AST酶活力高度關(guān)聯(lián)；有11個特征峰與血清中A L