健脾補(bǔ)腎解毒法對猴艾滋病的干預(yù)效果及猴模型進(jìn)展因素的研究.pdf

1、目的:
　　評價(jià)健脾補(bǔ)腎解毒法中藥對猴艾滋病的干預(yù)效果;
　　探討猴艾滋病模型不同類型的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)影響因素;
　　探索猴艾滋病模型長期不進(jìn)展型的內(nèi)在病理機(jī)制;
　　方法:
　　第一章、健脾補(bǔ)腎解毒法中藥治療猴艾滋病模型的效果
　　選用同期感染的、基線狀態(tài)相當(dāng)?shù)?只艾滋病恒河猴，隨機(jī)分為兩組，分別進(jìn)行連續(xù)8周的中藥和抗病毒藥治療，定期采血和采集腹股溝淺表淋巴結(jié)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束進(jìn)行胃腸道粘膜的標(biāo)本采集。檢測T細(xì)胞

2、純真亞群、記憶亞群、功能亞群，腸淋巴歸巢受體等免疫指標(biāo);血漿病毒載量及組織中SIVRNA和SIVDNA等病毒學(xué)指標(biāo);以及中醫(yī)證候指標(biāo)和病理學(xué)結(jié)構(gòu)的檢測，分析比較了中藥組和抗病毒藥組在治療過程中各指標(biāo)的差異。
　　第二章、猴艾滋病模型不同類型的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)影響因素探討
　　挑選符合長期不進(jìn)展型(LTNP)、一般進(jìn)展型(NP)、快速進(jìn)展型(RP)特點(diǎn)的三種類型恒河猴各10只，與同期5只健康恒河猴對比，分析感染前后不同類型間T細(xì)胞亞群

3、、中醫(yī)證候指標(biāo)及淋巴結(jié)病理的不同之處。找出不同類型進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的影響因素，并建立判別方程對其風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行預(yù)測。
　　第三章、探索猴艾滋病模型長期不進(jìn)展型的內(nèi)在病理機(jī)制
　　選入長期不進(jìn)展型艾滋病恒河猴4只，同期進(jìn)入試驗(yàn)的3只正常猴(Normal)和4只一般進(jìn)展型(NP) SIV猴，作為對照，連續(xù)觀察6個(gè)月，觀察期間三組均不進(jìn)行任何干預(yù)。定期采血和采集腹股溝淺表淋巴結(jié)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束進(jìn)行胃腸道粘膜的標(biāo)本采集。檢測T細(xì)胞純真亞群、記憶亞群、功

4、能亞群，腸淋巴歸巢受體等免疫指標(biāo);血漿病毒載量及組織中SIVRNA和SIVDNA等病毒學(xué)指標(biāo);以及中醫(yī)證候指標(biāo)和病理學(xué)結(jié)構(gòu)的檢測，分析比較三組各指標(biāo)的差異。
　　結(jié)果:
　　第一章、健脾補(bǔ)腎解毒法中藥治療猴艾滋病模型的效果
　　健脾補(bǔ)腎解毒法中藥治療雖然不能像HAART一樣明顯降低血漿和細(xì)胞內(nèi)的SIVDNA/RNA，但可以升高外周血的CD4。該亞群主要為CD4純真細(xì)胞;同時(shí)表達(dá)CD28上調(diào)、CCR5下調(diào)、β7+及CCR

5、9明顯增加。胃腸道粘膜內(nèi)β7+及CCR9的表達(dá)卻明顯降低。這一改變，可能與MAVS蛋白下降存在某些關(guān)聯(lián)。此外在一定程度上延緩了脾虛的出現(xiàn)和發(fā)展，相比HAART組，淋巴結(jié)病理結(jié)構(gòu)保存更完整，均顯示了健脾補(bǔ)腎解毒法中藥有相當(dāng)?shù)呐R床價(jià)值。
　　第二章、猴艾滋病模型不同類型的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)影響因素探討
　　1.各組動(dòng)物血漿病毒載量均在感染后10-14天達(dá)到高峰，平臺(tái)期出現(xiàn)分化。
　　2.與Normal相比，RP型的WBC明顯偏高，C

6、D4和LYM比例明顯偏低;而LTNP型的LYM數(shù)量偏高;
　　3.與其它類型相比，RP型的β2-MG顯著升高，T3顯著降低。
　　4.RP型在平臺(tái)期出現(xiàn)淋巴結(jié)縮小，生發(fā)中心明顯縮小的退變型，區(qū)別于其它各型。感染前WBC和LYM比例進(jìn)入判別方程，平臺(tái)期為T4和平臺(tái)期Log10RNA進(jìn)入判別方程，對所建立的判別函數(shù)的一致率進(jìn)行檢驗(yàn)，感染前和平臺(tái)期理論判別與實(shí)際資料的總吻合率分別為57.1％和91.2％。
　　第三章、探索猴

7、艾滋病模型長期不進(jìn)展型的內(nèi)在病理機(jī)制
　　LTNP組的血漿病毒載量情況、CD4數(shù)量、比例和記憶亞群、功能亞群均符合我們的預(yù)期，指標(biāo)大多介于NP組和正常組之間，此外我們發(fā)現(xiàn)LTNP組淋巴結(jié)中CCR5低表達(dá)，趨化于腸粘膜效應(yīng)部位因子的T細(xì)胞更高、且更接近于正常組。這可能是LTNP的重要特征、甚至參與了LTNP的形成。而作為病毒核酸受體TLR、RLR家族共同接頭信號(hào)蛋白的MAVS在LTNP明顯低于NP組，可能使得LTNP淋巴結(jié)中炎性細(xì)胞

8、因子較低，從而降低了淋巴細(xì)胞的活化，進(jìn)而延緩了疾病進(jìn)程，使得LTNP猴天然感染SIV病毒載量很低。各指標(biāo)都表明LTNP處在一種相對穩(wěn)定狀態(tài)，而非普通SIV感染處于的活化過度狀態(tài)。
　　結(jié)論:
　　1.該方藥可以升高CD4純真細(xì)胞;同時(shí)表達(dá)CD28上調(diào)、CCR5下調(diào)、β7及CCR9明顯增加，而且淋巴結(jié)病理結(jié)構(gòu)保存更完整，有一定的臨床價(jià)值和應(yīng)用前景。
　　2.LTNP、NP和RP三種進(jìn)展類型在平臺(tái)期有明顯差異，其中RP型有

9、更明顯的脾腎俱虛證候，提示脾腎俱虛有可能是艾滋病快速進(jìn)展的關(guān)鍵因素。另外，感染前的WBC和LYM比例可作為評價(jià)不同進(jìn)展類型的一個(gè)參考，而平臺(tái)期的Log10RNA和T4可用于預(yù)測不同類型進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)。
　　3.LTNP各方面指標(biāo)介于Normal和NP之間，甚至更偏向于Normal。淋巴結(jié)中CCR5低表達(dá)，趨化于腸粘膜效應(yīng)部位因子的T細(xì)胞更高、且更接近于正常組，而作為病毒核酸受體TLR、RLR家族共同接頭信號(hào)蛋白的MAVS在LTNP明顯