幽門螺桿菌對阿莫西林耐藥機(jī)制的初步探索.pdf

1、目的:通過體外誘導(dǎo)產(chǎn)生幽門螺桿菌對阿莫西林耐藥菌株，對耐藥菌株和敏感菌株表達(dá)差異蛋白點(diǎn)的功能進(jìn)行鑒定。 方法:以J99為出發(fā)菌株，采用連續(xù)傳代法，將J99在含有AMX的抗性平板上連續(xù)傳代，獲得耐藥菌株，采用三氯醋酸/丙酮沉淀法制取敏感菌株和耐藥菌株的全菌蛋白，對耐藥菌株和敏感菌株做雙向凝膠電泳，通過Image Master 2D Elite軟件對其蛋白質(zhì)圖譜進(jìn)行比較，從而找到表達(dá)差異的蛋白，對表達(dá)差異的蛋白點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)酶解，利用質(zhì)

2、譜技術(shù)和生物信息學(xué)分析差異蛋白的性質(zhì)和功能。 結(jié)果:通過質(zhì)譜和數(shù)據(jù)庫搜索對這些表達(dá)差異的蛋白點(diǎn)進(jìn)行鑒定顯示8個(gè)表達(dá)差異的蛋白斑點(diǎn)，其中1個(gè)蛋白斑點(diǎn)S-adenosylmethionine synthetase只在AMX原始菌株中表達(dá)，1個(gè)蛋白斑點(diǎn)co-chaperonin GroES只在耐藥菌株中表達(dá)。2個(gè)蛋白斑點(diǎn)30S ribosomal protein S4和flagellin在耐藥菌株中表達(dá)上調(diào)，4個(gè)蛋白斑點(diǎn)2-oxogl

3、utarate ferredoxin oxidoreductase、3-OXOACD COA-TRANSFERASE,SUBUNIT A、NADH dehydrogenase subunit Ⅰ和hypothetical protein在敏感菌株中表達(dá)量高于耐藥菌株。 結(jié)論:通過體外誘導(dǎo)產(chǎn)生一株耐阿莫西林菌株，當(dāng)有效的藥物作用于細(xì)菌時(shí)，細(xì)菌的代謝功能發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)菌表達(dá)的蛋白發(fā)生改變，對這些差異表達(dá)蛋白的研究有助于了解細(xì)菌耐藥