茶葉生物堿對(duì)胃蛋白酶部分理化性質(zhì)的影響.pdf

1、胃蛋白酶是動(dòng)物胃液中主要的蛋白水解酶，具有較強(qiáng)的專一性，催化具有苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸等肽鍵的斷裂，使大分子的蛋白質(zhì)變?yōu)檩^小的多肽。作為一種重要的蛋白水解酶，胃蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)，底物專一性，抑制作用等都與其它的蛋白酶不同，具有一定的理論研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。生物堿是一類含氮雜環(huán)的堿性天然有機(jī)物，廣泛存在于植物體內(nèi)，在醫(yī)藥上有重要的用途。本文基于生物堿的藥用價(jià)值，借助近年來(lái)發(fā)展迅速的光譜分析的辦法探討了三種茶葉生物堿小分子與胃蛋白酶的相互

2、作用。通過(guò)這三種生物堿對(duì)胃蛋白酶的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的影響以及與胃蛋白酶的相互作用的紫外光譜和熒光光譜的研究，對(duì)胃蛋白酶在三種小分子影響下的變化及作用機(jī)理作了初步推測(cè)。 首先對(duì)胃蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，本實(shí)驗(yàn)采用2000藥典方法，以血紅蛋白作底物，在275nm下以紫外分光光度法測(cè)定胃蛋白酶的活力，以每分鐘酶水解血紅蛋白生成一微摩爾的酪氨酸為一個(gè)活力單位。以血紅蛋白為底物作酶學(xué)性質(zhì)分析，測(cè)得Km值為0.86mmol／L，最適溫度為40℃

3、，最適pH2.0。 茶堿，咖啡因，可可堿對(duì)胃蛋白酶的動(dòng)力學(xué)影響主要表現(xiàn)在對(duì)胃蛋白酶有抑制作用，在不同的底物濃度下分別作三種生物堿對(duì)胃蛋白酶的抑制動(dòng)力學(xué)，求得茶堿ki值為1.08 × 10<'-3>mol／L，咖啡因ki值為1.46 × 10<'-3>mol／L，可可堿ki值為1.48 × 10<'-3>mol／L，三種生物堿的抑制劑類型為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。抑制作用大小依此為：茶堿>咖啡因>可可堿。 通過(guò)對(duì)茶堿，咖啡因，可可

4、堿與胃蛋白酶在200-400nm下分別作紫外濃度和時(shí)間差譜，發(fā)現(xiàn)茶堿，咖啡因與胃蛋白酶在3:1的摩爾濃度比，可可堿與胃蛋白酶在4:1的摩爾濃度比具有最明顯的紫外吸收差譜，同時(shí)發(fā)現(xiàn)處理時(shí)間對(duì)三種生物堿與胃蛋白酶作用影響不大，說(shuō)明它們與胃蛋白酶的結(jié)合可能是一個(gè)瞬時(shí)過(guò)程。 通過(guò)對(duì)茶堿，咖啡因，可可堿與胃蛋白酶在300-400nm下分別作室溫和37℃下的熒光發(fā)射光譜研究，發(fā)現(xiàn)這三種生物堿對(duì)胃蛋白酶具有熒光淬滅作用，按照stern-vol