海雀稗種質(zhì)資源遺傳多樣性研究和優(yōu)質(zhì)抗寒新品系選育.pdf

1、海雀稗（Paspalum vaginatum）是禾本科（Gramineae）雀稗屬（Paspalum）的一種重要鹽生植物，在美國南部、非洲、澳大利亞及太平洋沿岸等國家均有自然分布，在中國主要分布于廣東、海南、云南以及臺灣等地。海雀稗種植資源尤其是中國的資源研究甚少，目前在國內(nèi)推廣的海雀稗品種都是從國外引進的，雖然坪用質(zhì)量較高，抗鹽性較強，在我國沿海乃至內(nèi)陸地區(qū)得到較好的推廣應(yīng)用，但是由于其綜合抗性較差，在生產(chǎn)中存在很多問題沒有得到解決。

2、為此，本文首次通過形態(tài)特征和分子標記手段對從海南、廣東等地收集的國內(nèi)海雀稗野生種質(zhì)資源及國外引進的海雀稗品種進行遺傳多樣性研究，并利用葉片電解質(zhì)外滲法和匍匐莖恢復生長試驗，對國產(chǎn)海雀稗種質(zhì)資源和海雀稗引進品種進行抗寒性鑒定，同時對其坪用質(zhì)量進行評價，最后以引進品種‘Seadwarf'、‘Adalayd’、‘SeaIsle2000’、‘Salam’、‘Seaspray’、‘PlatinumTE’為對照，采用SRAP分子標記技術(shù)構(gòu)建其DNA

3、指紋圖譜，對坪用價值優(yōu)良及抗寒性強的新品系進行鑒定，以選育出適合我國本土的優(yōu)質(zhì)抗寒海雀稗新品種，滿足我國沿海開發(fā)生態(tài)建設(shè)的需要。有關(guān)研究結(jié)果如下:
　　1海雀稗種質(zhì)資源遺傳多樣性研究
　　1.1海雀稗種質(zhì)資源形態(tài)多樣性研究
　　通過對42份海雀稗種質(zhì)資源的6個營養(yǎng)性狀和7個生殖性狀進行觀測研究，采用SPSS13.0軟件對營養(yǎng)和生殖性狀的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。結(jié)果表明，海雀稗種質(zhì)資源在13個外部性狀上遺傳差異顯著，變異最大的

4、為草層高度與密度，變異系數(shù)分別為30.96％和30.94％。變異最小的為花序?qū)挾群托∷腴L度，變異系數(shù)為11.11％和7.58％。根據(jù)形態(tài)特征可將參試的海雀稗種質(zhì)資源及其品種分為六個形態(tài)類型。
　　1.2海雀稗SRAP-PCR分子標記體系優(yōu)化及其引物篩選
　　以國內(nèi)收集的海雀稗野生資源P18-2、P55和國外引進的海雀稗品種‘SeaIsle2000’和‘Adalayd'的葉片DNA為模板，采用L9(34)正-交實驗設(shè)計，對影響

5、海雀稗SRAP-PCR反應(yīng)的Mg2+，dNTP，引物，TaqDNA聚合酶的用量進行優(yōu)化，確立適合海雀稗的SRAP-PCR最佳反應(yīng)體系。結(jié)果表明:海雀稗SRAP-PCR最佳反應(yīng)體系為10× PCRbuffer1μL、模板DNA50 ng、Mg2+2.5 mmol/L、dNTP150μmol/L、引物0.4μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5 U，總體積10μL。利用該反應(yīng)體系從100對引物中篩選出可擴增清晰條帶的引物83對，在83對引物

6、中選出多態(tài)性豐富的引物44對。
　　1.3海雀稗種質(zhì)資源多樣性的SRAP標記分析
　　通過SRAP(Sequence-Related Amplified Polymorphism)分子標記技術(shù)對42份海雀稗種質(zhì)資源進行多樣性分析，結(jié)果表明30對引物共擴增出374條可以應(yīng)用于多樣性分析的譜帶，多態(tài)性比率(PPB)為85.83％（多態(tài)性帶321條）。6個引進品種的遺傳相似性非常高，國內(nèi)種質(zhì)資源與國外引進品種遺傳相似性很低，通過分

7、子系統(tǒng)聚類法，將42份海雀稗種質(zhì)資源分為七個類群。
　　2海雀稗種質(zhì)資源坪用價值評價
　　對42份海雀稗種質(zhì)資源用9個坪用質(zhì)量指標進行坪用價值評價，結(jié)果表明‘Seadwarf的坪用價值最高，綜合評分為7.91，排名第二的是‘Platinum TE’為7.82分，國內(nèi)的品種P55以7.55的高分排名第4。P55綜合排名高于‘Adalayd'，‘Salam’和‘Seaspray’三個國外品種。P68、P17、P38、P56、P3

8、3、P40、P14、P50、P02這9份種質(zhì)資源的坪用質(zhì)量也相對較高。
　　3海雀稗種質(zhì)資源的抗寒性鑒定
　　采用葉片電解質(zhì)外滲法和匍匐莖恢復生長試驗，對37份國產(chǎn)海雀稗種質(zhì)資源和6份海雀稗引進品種進行抗寒性鑒定。綜合分析兩種抗寒性方法的鑒定結(jié)果，P49、‘Salam’、‘Seaspray’、P42、P13、‘Adalayd’、P56、P60、P06葉片的抗寒性較強。P55(1)、P05、P09、P18-2、P37、P27、

9、P55、P28、P29、P33、P54、P30、‘Seadwarf'、P68為低溫脅迫后恢復能力較強的材料。其中P18-2、P37、P27是綜合抗寒性較好的材料。
　　4優(yōu)質(zhì)抗寒海雀稗新品系DNA指紋圖譜的構(gòu)建
　　對國內(nèi)種源中篩選出來的8個優(yōu)質(zhì)抗寒海雀稗新品系和6個引進品種，采用SRAP分子標記技術(shù)構(gòu)建其DNA指紋圖譜。結(jié)果18對引物一共擴增出312條清晰的條帶，多態(tài)性比率為75％（多態(tài)性條帶234條）。18對引物中Me7