電離輻射引起骨髓微環(huán)境中趨化因子CCL3及CXCL14濃度改變機(jī)制.pdf

1、電離輻射會(huì)引起機(jī)體基因的改變從而引發(fā)一系列病理生理變化,因此從這一變化的機(jī)制角度加以分析可以為輻射防護(hù)研究以及輻射相關(guān)的藥物開(kāi)發(fā)提供參考。在對(duì)前期基因芯片結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步分析后,我們得到了在輻照導(dǎo)致的骨髓損傷的修復(fù)階段,免疫反應(yīng)(主要是造血作用)發(fā)揮了關(guān)鍵性功能;主要參與造血干細(xì)胞的自我更新、增殖及分化,加速機(jī)體恢復(fù)。因此,我們選擇參與免疫反應(yīng)(包括造血作用)的分泌性趨化因子CCL3和CXCL14進(jìn)行蛋白水平的初步分析。并且構(gòu)建假說(shuō):在輻

2、射損傷修復(fù)階段,機(jī)體通過(guò)自發(fā)下調(diào) CCL3表達(dá)以及增加CCL3的水解作用促進(jìn)干細(xì)胞的增殖,同時(shí)上調(diào)CXCL14的表達(dá)促進(jìn)機(jī)體修復(fù)。
　　首先,構(gòu)建半致死劑量輻照損傷動(dòng)物模型,通過(guò)外周血細(xì)胞及骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)以及骨髓細(xì)胞涂片觀察在損傷修復(fù)階段血細(xì)胞的改變及恢復(fù)情況。其次,通過(guò)ELISA試劑盒對(duì)輻照損傷動(dòng)物模型骨髓微環(huán)境中CCL3和CXCL14蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)骨髓細(xì)胞分泌的能夠水解CCL3的蛋白水解酶CtsG蛋白含量通過(guò)We

3、stern Blot方法進(jìn)行檢測(cè),分析目標(biāo)蛋白在輻照損傷修復(fù)階段的濃度的變化趨勢(shì)以及對(duì)于引起這一濃度改變的機(jī)制進(jìn)行探討。
　　結(jié)果顯示骨髓損傷修復(fù)階段骨髓有核細(xì)胞的恢復(fù)先于外周血白細(xì)胞及血小板的恢復(fù),紅細(xì)胞受輻照刺激影響較小;骨髓細(xì)胞涂片結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了輻照引起了骨髓細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷,其中電離輻射對(duì)成熟紅細(xì)胞的損傷作用最小;蛋白檢測(cè)結(jié)果中骨髓損傷修復(fù)過(guò)程中微環(huán)境中趨化因子CCL3顯著降低,CXCL14保持不變;水解CCL3的蛋白水解

4、酶CtsG在細(xì)胞中濃度升高。該結(jié)果進(jìn)一步證明CCL3在輻照損傷修復(fù)階段發(fā)揮主要作用,機(jī)體通過(guò)自發(fā)下調(diào) CCL3及加速其蛋白水解兩方面減少CCL3對(duì)造血干細(xì)胞的增殖抑制。而CXCL14蛋白變化趨勢(shì)與mRNA不符可能與輻射急性期泛素化水平升高有關(guān),結(jié)果說(shuō)明CXCL14與輻照損傷后機(jī)體恢復(fù)無(wú)關(guān),然而卻可能與電離輻射初期泛素化水平顯著升高及電離輻射引起的致癌性有關(guān)。
　　綜上,我們對(duì)前期基因芯片結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步研究,證明 CCL3是機(jī)體損傷