趨化因子CXCL11-I-TAC和CCL22-MDC在病理性瘢痕中的表達(dá).pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 瘢痕是各種皮膚損傷誘發(fā)的連鎖性體液—細(xì)胞反應(yīng)，導(dǎo)致以纖維蛋白為主的修復(fù)過(guò)程的產(chǎn)物。根據(jù)其組織學(xué)和形態(tài)學(xué)區(qū)別，可分為四類：表淺性瘢痕、萎縮瘢痕性、增生性瘢痕，瘢痕疙瘩。其中增生性瘢痕(hypertrophic scar，HTS)和瘢痕疙瘩(keloid，K)又統(tǒng)稱為病理性瘢痕(pathological scars)。臨床上病理性瘢痕不但發(fā)病率高，嚴(yán)重影響人類生存質(zhì)量，而且有惡變傾向。目前，由于創(chuàng)面愈合的多細(xì)胞參與、多階

2、段發(fā)展、多空間變化的復(fù)雜性等原因，病理性瘢痕形成的具體機(jī)理仍不清晰。本研究基于瘢痕形成的免疫學(xué)假說(shuō)，首次研究Th1趨化因子——干擾素誘導(dǎo)的T細(xì)胞α類趨化因子(CXCL11/Ⅰ-TAC)和Th2趨化因子——巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(CCL22/MDC)在病理性瘢痕組織中的表達(dá)，探討其在病理性瘢痕發(fā)病機(jī)制中的作用。 實(shí)驗(yàn)方法: 瘢痕疙瘩患者24例為A組，男性11例，女性13例，年齡9—45歲，平均29±16.7歲，病變部位包括

3、前胸、肩背部及耳垂等，病程1.5年—28年。增生性瘢痕患者33例為B組，男性13例，女性20例，年齡13—58歲，平均36±21.2歲，病變部位包括面部、前胸、背部及四肢等，病程7個(gè)月—21年。瘢痕表面無(wú)感染及潰瘍，表面顏色由紅至白不等，術(shù)前未行激光、冷凍、外用或局部注射藥物等任何治療，患者無(wú)皮膚、免疫及傳染性疾病。同時(shí)選取其他整形美容手術(shù)患者切除的正常皮膚組織15例，作為對(duì)照C組。將新鮮組織置于冰盒內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室，行OCT包埋，—80

4、℃保存，實(shí)驗(yàn)前將標(biāo)本塊經(jīng)冰凍切片機(jī)制成5μm厚的冰凍切片。丙酮固定30分鐘干燥后，PBS沖洗3次，3％過(guò)氧化氫抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性10分鐘，PBS沖洗3次，免疫血清阻斷非特異性抗原10分鐘，在每個(gè)標(biāo)本分別加30μl一抗即Ⅰ-TAC或MDC(1：50稀釋)，4℃濕盒過(guò)夜，PBS沖洗3次后，滴加1：200稀釋生物素化二抗，37℃恒溫孵育20分鐘，PBS沖洗3次，滴加1：200稀釋ABC復(fù)合物即三抗，37℃恒溫孵育20分鐘，PBS沖洗3次

5、；滴加50μlAEC染液復(fù)染，鏡下觀察控制染色效果，染色時(shí)間約3—10分鐘，自來(lái)水洗凈，室溫晾干；蘇木精復(fù)染3—5秒鐘；用流水沖洗30分鐘，氨水反藍(lán)；陰性對(duì)照組省略第一抗體，用PBS緩沖液代替。封片，保存，鏡下觀察，照相。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ-TAC和MDC著色后細(xì)胞漿呈紅色顆粒狀，為陽(yáng)性表達(dá)。每例標(biāo)本選取10個(gè)高倍鏡視野(×400)計(jì)數(shù)，采用雙人盲法，檢測(cè)切片中陽(yáng)性細(xì)胞占同類細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)和陽(yáng)性細(xì)胞的著色強(qiáng)度，應(yīng)用半定量分級(jí)方法將其分為

6、4個(gè)等級(jí)：①陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)少于細(xì)胞總數(shù)的10％，為(-)；②陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為細(xì)胞總數(shù)的10％——30％，細(xì)胞漿呈淺紅色，為(+)；③陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為細(xì)胞總數(shù)的30％——60％，細(xì)胞漿呈紅色，為(++)；④陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)60％以上，細(xì)胞漿呈深紅色，為(+++)。采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行非參數(shù)Kruskal—Wallis檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，取α=0.01，即P＜0.01時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 一、Ⅰ-TAC和MDC在病

7、理性瘢痕組織中的定位 Ⅰ-TAC和MDC彌漫性分布于真皮內(nèi)成纖維細(xì)胞，局部分布于表皮內(nèi)角質(zhì)形成細(xì)胞中，呈顆粒狀，突出定位于細(xì)胞漿內(nèi)。 二、Ⅰ-TAC和MDC在成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)比 Ⅰ-TAC和MDC在A、B組中呈高表達(dá)，與C組比較其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，但A、B組之間比較其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論: Ⅰ-TAC和MDC可能通過(guò)趨化Th1/2淋巴細(xì)胞定向遷移引發(fā)一系