補(bǔ)腎疏肝方對更年期綜合征雌鼠生殖內(nèi)分泌及下丘腦垂體ERαmRNA表達(dá)的影響及其機(jī)理研究.pdf

1、目的： 探討更年期綜合征的基本病機(jī)，從生殖內(nèi)分泌、下丘腦及垂體雌激素受體αmRNA的表達(dá)等基因水平初步闡明中藥補(bǔ)腎疏肝方治療更年期綜合征的作用及其機(jī)制，初步揭示更年期綜合征“腎虛肝郁”病機(jī)理論的科學(xué)內(nèi)涵。 方法： ①本實驗采用12周齡雌性未孕Wistar大鼠60只，體重250g±10g，隨機(jī)取12只作為正常對照組，其余48只均采取雙側(cè)卵巢切除手術(shù)加夾尾激怒法造模，造模成功后隨機(jī)分為模型組、乙烯雌酚組、更年康組、補(bǔ)

2、腎疏肝方組，每組12只．造模結(jié)束后連續(xù)灌胃4周。末次灌胃禁食24小時后進(jìn)行指標(biāo)檢測。 ②放免法檢測血清雌二醇(E2)、睪酮(T)、卵泡刺激素(FSH)含量。 ③放免法檢測血漿血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列素F1α(6-keto-PGF1α)含量，并計算TXB2/6-keto-PGF1α比值。 ④電子天平稱取各組大鼠腎上腺、子宮的濕重，將臟器濕重?fù)Q算成每100g體重mg數(shù)，即臟器重量系數(shù)。光學(xué)顯微鏡觀察各組大

3、鼠子宮、腎上腺組織形態(tài)學(xué)的變化及電子顯微鏡觀察各組大鼠子宮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。 ⑤TUNEL方法檢測各組大鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡率和子宮肌層細(xì)胞凋亡率變化。⑥逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測各組大鼠下丘腦、垂體組織雌激素受體α(ER α)的mRNA水平的變化。 結(jié)果： ①各組大鼠血清E2、T、FSH含量：與正常對照組比較，模型組大鼠血清E2、T水平明顯降低(P<0.01)，F(xiàn)SH水平明顯升高(P<0.01)

4、。與模型組比較，補(bǔ)腎疏肝方組大鼠血清E2、T水平雖有不同程度的升高，但統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異(P>0.05)，F(xiàn)SH水平顯著降低(P<0.05)。 ②各組大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值比較：與正常對照組比較，模型組大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值明顯升高(P<0.05)。與模型組比較，補(bǔ)腎疏肝方組血漿TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值明顯降低(P<0.05)

5、． ③各組大鼠子宮及腎上腺的濕重系數(shù)及形態(tài)學(xué)改變：與正常對照組比較，模型組大鼠子宮濕重系數(shù)明顯降低(P<0.01)，腎上腺濕重系數(shù)明顯降低(P<0.01)．與模型組比較，補(bǔ)腎疏肝方組大鼠子宮濕重系數(shù)明顯升高(P<0.05)，腎上腺濕重系數(shù)有所升高，但統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異(P>0.05)．光鏡下，模型組大鼠子宮各層呈現(xiàn)明顯萎縮性變化；補(bǔ)腎疏肝方組與模型組有類似的萎縮性病理改變，但其內(nèi)膜層病變較模型組減輕，表現(xiàn)在蛻膜細(xì)胞趨于典型腺上皮

6、呈低柱狀，可見分泌活動。電鏡下，模型組大鼠子宮內(nèi)膜纖毛細(xì)胞游離面纖毛稀疏，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，呈空泡樣改變，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)不豐富，有局部灶狀擴(kuò)張，形成不規(guī)則的囊腔，未見游離核糖體、致密顆粒及脂滴；補(bǔ)腎疏肝方組子宮內(nèi)膜大鼠纖毛細(xì)胞游離面纖毛較模型組略稠密，但不及乙烯雌酚組，線粒體結(jié)構(gòu)數(shù)目尚可，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)目豐富，胞質(zhì)內(nèi)有脂滴存在。光鏡下，模型組大鼠腎上腺皮質(zhì)有明顯的萎縮現(xiàn)象，補(bǔ)腎疏肝方組大鼠腎上腺皮質(zhì)萎縮狀況較模型組減輕。 ④各組大鼠子

7、宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡率和子宮肌層細(xì)胞凋亡率比較：與正常對照組比較，模型組大鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡率明顯升高，約為正常組的4倍(P<0.01)，模型組大鼠子宮肌層細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。與模型組比較，補(bǔ)腎疏肝方組大鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡率明顯降低(P<0.01)，子宮肌層細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05)． ⑤各組大鼠ER αmRNA在下丘腦、垂體的表達(dá)：與正常對照組比較，模型組大鼠垂體和下丘腦ER αmRNA的表達(dá)明顯下降(P<

8、0.05)．與模型組比較，補(bǔ)腎疏肝方組大鼠垂體和下丘腦雌ER αmRNA的表達(dá)明顯上升(P<0.05)． 結(jié)論： 本課題提出了“腎虛肝郁”是更年期綜合征基本病機(jī)的觀點，首次采用去卵巢加夾尾激怒法成功復(fù)制出腎虛肝郁型更年期綜合征大鼠模型，發(fā)現(xiàn)模型大鼠不僅有腎虛和肝郁的表現(xiàn)，而且還有相應(yīng)的客觀指標(biāo)變化，如血清E2、T水平明顯降低，而FSH水平明顯升高；血漿TXB2水平和TXB2/6-Keto-PGF1a比值均升高；子宮及腎上

9、腺濕重系數(shù)明顯降低；光鏡和電鏡下可見子宮和腎上腺皮質(zhì)有萎縮現(xiàn)象；子宮內(nèi)膜細(xì)胞及子宮肌層細(xì)胞凋亡率升高；垂體和下丘腦雌激素受體ER αmRNA的表達(dá)下降．實驗研究表明，補(bǔ)腎疏肝方能使模型大鼠血清E2、T水平有所升高，而FSH水平降低；血漿TXB2水平和TXB2/6-Keto-PGF1a比值降低；子宮及腎上腺濕重系數(shù)升高；子宮內(nèi)膜層及腎上腺皮質(zhì)萎縮狀況減輕；子宮內(nèi)膜細(xì)胞及子宮肌層細(xì)胞凋亡率降低；垂體和下丘腦雌激素受體ER αmRNA的表達(dá)提