音猥因子通過下調(diào)pRb的表達(dá)水平促進(jìn)哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞再生.pdf

1、[目的]耳毒性藥物及噪聲所引起的毛細(xì)胞丟失是感音神經(jīng)性耳聾的主要致病原因。但與低等非脊椎動(dòng)物不同，哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞無自發(fā)性再生能力，因此毛細(xì)胞丟失所導(dǎo)致的感音神經(jīng)性耳聾目前仍是臨床治療中的一大難題。找到促進(jìn)哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞原位再生的生物學(xué)途徑是治療感音神經(jīng)性耳聾的重要研究方向。
　　[方法]本實(shí)驗(yàn)采用新生SD大鼠體外耳蝸培養(yǎng)模型，研究Shh在促進(jìn)新生哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞及支持細(xì)胞再生中的作用及其機(jī)制。為了進(jìn)一步研究誘導(dǎo)成年耳蝸再

2、生的方法，我們采用Er-Cre Rb loxp/loxp轉(zhuǎn)基因鼠，在體外培養(yǎng)模型中敲除Rb1基因，研究其對(duì)成年耳蝸毛細(xì)胞及支持細(xì)胞再生中的促進(jìn)作用。
　　[結(jié)果]1）.在新生大鼠耳蝸新霉素?fù)p傷體外模型中，Shh蛋白可促進(jìn)支持細(xì)胞增殖，部分增殖的支持細(xì)胞可轉(zhuǎn)分化為毛細(xì)胞，新生毛細(xì)胞表達(dá)前體細(xì)胞標(biāo)記物Pax2與Sox2。2）.通過RT-PCR研究方法，顯示新生耳蝸體外培養(yǎng)中加入Shh蛋白可成功激活Hh信號(hào)通路，使其下游多種作用因子表達(dá)

3、上調(diào)，從而進(jìn)一步產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞增殖與分化的調(diào)控作用。3).Shh通過抑制pRb功能促進(jìn)毛細(xì)胞再生。Shh通過抑制pRb蛋白的表達(dá)及促進(jìn)其過磷酸化兩個(gè)方面同時(shí)抑制pRb的功能。并誘導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白Cyclin B1，Cyclin D2，Cyclin D3和Cdc2的上調(diào)，從而促進(jìn)靜止期細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期。4）.在成年小鼠內(nèi)耳感覺上皮體外培養(yǎng)模型中，Rb1敲除能夠促進(jìn)耳蝸和橢圓囊的支持細(xì)胞及毛細(xì)胞增殖。
　　[結(jié)論]1）.Shh可促進(jìn)毛細(xì)