電針任督脈和人臍血MSCs移植對腦缺血大鼠保護研究.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是個人在導師的指導下，獨立進行研究工r’作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名遂!塑望日期：如H年j，月：；3日關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學有關保留使用學

2、位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門機構送交論文的復印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權廣州中醫(yī)藥大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復印手段保存和匯編本學位論文。(保密論文在解密后應遵守此規(guī)定)論文作者簽名拯鵝窆論文導師簽名日期：如《￥年r月；J只CD73、CDl05、CD44、CD29、CD45、CD34、CDl9、CDl4和HLA—DR的表達。取部分P3代的人臍血MSCs，

3、連續(xù)12天進行細胞生長曲線測定。22電針任督脈經(jīng)穴聯(lián)合人臍血MSCs移植對腦缺血大鼠的干預機制研究SPF級成年健康雄性SD大鼠120只，隨機分為假手術組、PBS移植組、人臍血MSCs移植組、電針督脈人臍血MSCs移植組和電針任督脈人臍血MSCs移植組。每組再分別隨機分成7天組、14天組和28天組，每亞組各8只。運用線栓法造成動物右側(cè)局灶性腦缺血再灌注模型。造模24小時后，人臍血MSCs移植組和聯(lián)合電針組都予以大鼠右側(cè)紋狀體和皮層下人臍血

4、MSCs移植，PBS移植組于相同部位以等量的PBS注射。聯(lián)合電針組在人臍血MSCs移植手術24小時后于任脈(承漿、氣海、關元)和督脈(大椎、百會、水溝)行電針治療，采用疏密波刺激(疏波30Hz，密波lOOHz)，強度6—15V，作用20min，每天1次直到老鼠處死為止。假手術組和PBS移植組在手術24小時后固定在動物固定臺上20min，不進行任何治療。各組大鼠按實驗設計時間處死、取腦。運用改良的神經(jīng)功能缺損評分(mNSS)評估每組大鼠神

5、經(jīng)功能缺損情況；運用HE染色觀察各組動物移植部位附近的病理形態(tài)學改變；運用免疫組化方法對移植區(qū)域附近VEGF陽性細胞進行標記；運用TUNEL法觀察移植區(qū)域附近腦組織細胞凋亡情況。利用德國LeiCaDCSoftware數(shù)碼圖像分析系統(tǒng)軟件包行圖像分析。200倍光鏡下行陽性細胞計數(shù)，利用SPSS150軟件行統(tǒng)計分析，對比各組間差異。3、結果：31本實驗共分離培養(yǎng)17份臍血，成功培養(yǎng)出人臍血MSCs4份，成功率高達到235％。當MNCs加入培

6、養(yǎng)基及生長因子進行培養(yǎng)后，顯微鏡下觀察約3—7天即可見少量形態(tài)各異的貼壁細胞，培養(yǎng)瓶內(nèi)含有大量懸浮的粒細胞。當貼壁細胞增殖到一定量時進行全量換液，此后約換液25次細胞融合度可達到80％以上，可見成纖維細胞樣克隆形成和形態(tài)相對均一的梭形細胞，呈漩渦狀生長或放射狀生長。傳代后細胞顯著加快其生長速度，于接種后第45天其生長趨勢最為明顯，數(shù)目顯著增加。第5、6天，細胞鋪滿培養(yǎng)瓶底，連接成片狀。整個原代培養(yǎng)需時約為15—30天，此后每傳1代約需4

7、5天。流式鑒定結果顯示，PO和P3代細胞均表達CD90、CD73、CDl05、CD44和CD29，不表達造血系細胞表面標記CD45、CD34、CDl9或CDl4，對組織相容性免疫表型的分析顯示人臍血MSCs不表達HLA—DR抗原。32與假手術組大鼠對比，其余組動物經(jīng)成功造模后，都表現(xiàn)出一定程度神經(jīng)功能缺損癥狀，如不能徹底伸展左前肢、向左側(cè)轉(zhuǎn)圈、向左側(cè)傾倒、不能自行行走且意識程度降低等。PBS移植組、人臍血MSCs移植組、督脈聯(lián)合人臍血M