三葉因子2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及相關(guān)性實(shí)驗(yàn)探究.pdf

1、【背景】
　　子宮內(nèi)膜癌是好發(fā)于子宮內(nèi)膜的一種上皮性惡性腫瘤,是常見的女性生殖道三大惡性腫瘤之一,約占婦科腫瘤的20％~30%,近年來的發(fā)病率及病死率均有上升趨勢。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病原因一直是研究的熱點(diǎn),被認(rèn)為是雌激素依賴性腫瘤,雌激素受體(ER)廣泛存在于子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞中,是子宮內(nèi)膜接受雌激素統(tǒng)一調(diào)節(jié)的物質(zhì)基礎(chǔ),其含量及分布隨體內(nèi)雌激素的水平變化而變化,以完成不同生殖狀態(tài)下對子宮內(nèi)膜功能的調(diào)節(jié)作用。雌激素受體在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)

2、可反映腫瘤的生物學(xué)特性,與病人的治療及預(yù)后有關(guān)。因此如何能夠早期診斷及有效治療子宮內(nèi)膜癌,對提高子宮內(nèi)膜癌患者生存率具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　三葉因子2(Trefoilfactors2,TFF2)是近年來新發(fā)現(xiàn)的胃腸道粘膜保護(hù)因子,在胃粘膜疾病及自身保護(hù)與修復(fù)中的作用正日益受到人們的關(guān)注。近年來的研究表明TFF2與腫瘤關(guān)系密切,目前有關(guān)TFF2異常表達(dá)在胃癌、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、膽管上皮癌、視網(wǎng)膜腫瘤及前列腺癌中均有報道,且TF

3、F2在大部分腫瘤中多為抑癌因子,因此我們預(yù)測TFF2在子宮內(nèi)膜癌病程中可能是一個可利用的潛在靶點(diǎn)。
　　為了驗(yàn)證TFF2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)作用,本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測TFF2在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá),分析TFF2與子宮內(nèi)膜癌之間的關(guān)系。應(yīng)用RNAi技術(shù)上調(diào)與下調(diào)TFF2在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá),用qRT-PCR、westernblot、MTT、流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測觀察TFF2對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響,探討TFF2

4、與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系,為子宮內(nèi)膜癌的診斷及預(yù)后提供新的生物學(xué)指標(biāo)。
　　【研究目的】
　　探討TFF2在子宮內(nèi)膜癌中的作用及其分子機(jī)制
　　【研究方法】
　　1.免疫組織化學(xué)法檢測TFF2在不同子宮內(nèi)膜組織,不同子宮內(nèi)膜癌分期及分級中的表達(dá)情況。
　　2.應(yīng)用RNAi技術(shù),下調(diào)與上調(diào)TFF2在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)。qRT-PCR技術(shù)檢測下調(diào)與上調(diào)TFF2后,TFF2mRNA水平的變化。
　　

5、3.Westernblot技術(shù)檢測下調(diào)與上調(diào)TFF2后,TFF2,CyclinD1,Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平的變化。
　　4.MTT法檢測下調(diào)與上調(diào)TFF2后,對細(xì)胞生長的影響。
　　5.流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測下調(diào)與上調(diào)TFF2后,對細(xì)胞周期與凋亡的影響。
　　【研究結(jié)果】
　　1.TFF2在正常子宮內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率為85.7%(12/14),在不典型增生組織中的陽性表達(dá)率72.7%(16/22),在子宮內(nèi)膜

6、癌中的陽性表達(dá)率為57.3%(47/82),三組子宮內(nèi)膜組織中TFF2蛋白的陽性表達(dá)率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P<0.01),TFF2表達(dá)與腫瘤的分化程度,腫瘤的分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度有關(guān)(P<0.05),與浸潤程度無關(guān)。
　　2.成功構(gòu)建了TFF2的小干擾RNA載體
　　3.上調(diào)TFF2后TFF2基因mRNA表達(dá)水平顯著升高,下調(diào)TFF2后,TFF2mRNA水平明顯減低。
　　4.上調(diào)TFF2后TFF2蛋白表達(dá)水平顯著升高,Cyc

7、linD1蛋白含量明顯降低,Bax/Bcl-2比值明顯增高(P均<0.05)。
　　5.下調(diào)TFF2后,TFF2蛋白水平明顯減低,CyclinD1蛋白含量明顯增高,Bax/Bcl-2比值明顯降低(P均<0.05)。
　　6.上調(diào)TFF2后可導(dǎo)致人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生長速度明顯減慢;下調(diào)TFF2后可導(dǎo)致人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖速度明顯加快。
　　7.上調(diào)TFF2可導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)G1期阻滯,凋亡增多;下調(diào)TFF2可導(dǎo)致細(xì)胞的G1

8、期比例減少,S期比例增多凋亡減少。
　　【結(jié)論】
　　1.免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在子宮內(nèi)膜癌和癌前病變組織中TFF2的表達(dá)下調(diào),提示TFF2可能是一種子宮內(nèi)膜腫瘤抑制因子,TFF2表達(dá)的降低也許與腫瘤抑制、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡等功能異常有關(guān),促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。
　　2.TFF2通過調(diào)控CyclinD1、Bax、Bcl-2的表達(dá),調(diào)節(jié)細(xì)胞的周期,影響細(xì)胞的生長及凋亡。
　　3.上調(diào)與下調(diào)TFF2在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)