酞酸酯類藥物殘留分析方法的研究.pdf

1、酞酸酯是一類環(huán)境激素。它干擾生物體內(nèi)保持平衡并調(diào)節(jié)生長(zhǎng)過程的激素正常的產(chǎn)生、釋放、轉(zhuǎn)移、代謝、反應(yīng)和消除，或引起生物后代不健康的影響和內(nèi)分泌功能的改變。
　　 免疫檢測(cè)技術(shù)是國(guó)內(nèi)外小分子快速檢測(cè)的重要領(lǐng)域之一。本文針對(duì)鄰苯二甲酸二辛酯的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)、合成了一種半抗原，并制備得到了一種抗原。用原料4-硝基鄰苯二甲酸經(jīng)過與正辛醇進(jìn)行酯化反應(yīng)，得到4-硝基鄰苯二甲酸二辛酯。通過將苯環(huán)上的硝基還原形成苯環(huán)上具有氨基的半抗原，用重氮化法將此氨

2、基偶聯(lián)到載體蛋白牛血清蛋白(BSA)作為免疫抗原(DOP-BSA)，用重氮化法將此氨基偶聯(lián)到載體蛋白卵清蛋白(OVA)作間接ELISA反應(yīng)的包被原(DOP-OVA)。用紫外/可見分光光度計(jì)對(duì)合成的人工抗原進(jìn)行鑒定，與半抗原和偶聯(lián)物、蛋白的掃描結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果顯示偶聯(lián)物具備半抗原和蛋白的雙重特征吸收峰，因此可以判斷偶聯(lián)成功，并估算免疫原和包被原的偶聯(lián)比分別為18和7.5。
　　 用上述合成的人工免疫抗原(DOP-BSA)免疫兩只

3、新西蘭大白兔，制備出抗血清，效價(jià)依次為48000、12000，針對(duì)與半抗原結(jié)構(gòu)最相似的鄰苯二甲酸二辛酯，建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法并對(duì)包被時(shí)間、封閉時(shí)間、抗體的工作量、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液甲醇含量、競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間、顯色時(shí)間等條件進(jìn)行優(yōu)化。包被原的稀釋倍數(shù)為1600，抗體工作濃度為血清稀釋4000倍，IC50為19.2ng/mL，檢測(cè)限為1.9ng/mL，線性范圍為5-75ng/ml，并在此條件對(duì)3種酞酸酯和類似物進(jìn)行交叉反應(yīng)試驗(yàn)，達(dá)到對(duì)鄰苯二甲酸