miR-219時(shí)空表達(dá)特征及功能研究.pdf

1、本研究利用整體原位雜交和Northem雜交技術(shù)分析了miR-219在斑馬魚、大鼠、恒河猴體內(nèi)的時(shí)空表達(dá)特征。我們發(fā)現(xiàn)miR-219在恒河猴和大鼠呈現(xiàn)腦特異性達(dá)和隨年齡梯度升高的表達(dá)模式。miR-219在斑馬魚上的主要表達(dá)在中后腦和脊髓，從16體節(jié)期開始表達(dá)到2dpf時(shí)表達(dá)最高。采用基因沉默和過表達(dá)技術(shù)觀察到斑馬魚受精卵在顯微注射miR-219和反義miR-219后均導(dǎo)致其胚胎發(fā)育缺陷，尤其是過表達(dá)miR-219后胚胎缺陷表型更為明顯，主

2、要是尾部縮短和體節(jié)異常(擬ntl基因突變表型)，并且這種表型的程度具有劑量響應(yīng)性。在此基礎(chǔ)上，我們對(duì)miR-219的可能作用機(jī)制進(jìn)行了分析。首先，我們采用TUNEL技術(shù)觀察到在斑馬魚中過表達(dá)miR-219可以誘導(dǎo)胚胎細(xì)胞凋亡。其次，我們發(fā)現(xiàn)在大鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)元中過表達(dá)miR-219亦出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。再次，我們采用計(jì)算生物學(xué)算法預(yù)測(cè)了miR-219的可能靶基因，篩選了在胚胎體軸形成、腫瘤發(fā)生和細(xì)胞凋亡可能有起相應(yīng)作用的靶基因，并對(duì)其中一個(gè)靶