骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、銀杏提取物及電針治療多發(fā)性硬化的機理探討.pdf

1、多發(fā)性硬化(MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種慢性炎性脫髓鞘疾病，常常出現(xiàn)癱瘓、失明等神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀。本病好發(fā)于青壯年，病程長，反復(fù)發(fā)作，遷延不愈，是世界公認(rèn)的疑難病之一。由于MS詳盡的發(fā)病機制目前仍屬未知，故現(xiàn)階段無肯定而有效的防治措施。臨床治療MS以激素和免疫抑制劑為主，但是長期應(yīng)用激素和免疫抑制劑帶來很大副作用，且費用較高，停藥后常出現(xiàn)癥狀反彈或加劇。因此研究和探討MS的病因、病機，尋找有效的防治措施有著重要的理論意義和實用價值。

2、 本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)、分子生物學(xué)、電鏡及流式細(xì)胞分析等多項技術(shù)探討：①骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向少突膠質(zhì)樣細(xì)胞定向分化的潛能：②銀杏提取物(GBE)治療慢性脫髓鞘模型PLP轉(zhuǎn)基因鼠的應(yīng)用前景和機制；③電針血清對體外培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞活性的影響，以期為MS的病因和發(fā)病機制及臨床治療提供實驗依據(jù)。 1.F3/Noteh信號系統(tǒng)誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向少突膠質(zhì)樣細(xì)胞定向分化 方法： 貼壁分離得到的hBMSCs經(jīng)

3、β-ME(24h)和RA(3d)預(yù)誘導(dǎo)后，分為MFS組(5mM forskolin、10ng/ml bFGF、5ng/mlPDGF、200 ng/mL,HRG；陽性對照組)和F3組再繼續(xù)培養(yǎng)3d，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光染色、Luciferase分析不同誘導(dǎo)階段細(xì)胞的生物特性。隨后將RA/β-ME、MFS/SA/β-ME和F3/RA/β-ME誘導(dǎo)后的細(xì)胞移植入小鼠玻璃體腔，采用免疫熒光染色及電鏡技術(shù)觀察體內(nèi)移植后細(xì)胞的形態(tài)特征和功能。

4、 結(jié)論： hBMSCs具有跨胚層向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的潛能，F(xiàn)3通過激活F3/Notch信號系統(tǒng)促使CD90(+)hBMSCs來源的OLLCs形態(tài)及功能成熟。 2．銀杏提取物對PLP轉(zhuǎn)基因鼠的影響 方法： 將3月齡plp<'tg/->小鼠分為PLP組(對照組)和GBE組(治療組)，GBE組plp<'tg/->小鼠每日腹腔注射GBE(70mg/kg)，PLP組plp<'tg/->小鼠每日腹腔注射同樣劑量

5、生理鹽水，治療2個月，進行行為學(xué)檢測及免疫組化染色分析。同時體外培養(yǎng)少突膠質(zhì)細(xì)胞系OLN細(xì)胞，應(yīng)用MTT法和免疫熒光染色直接觀察GBE對少突膠質(zhì)細(xì)胞的影響。 結(jié)論：GBE可能主要通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活，減少CD4+T細(xì)胞的炎癥性浸潤，從而延緩plp<'tg/->小鼠脫髓鞘進程，提示GBE對MS的防治具有應(yīng)用前景。 3．電針血清對體外培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞活性的影響 方法： 采用100HZ高頻電針針刺正常大鼠百會、

6、風(fēng)府兩穴，電針兩周后取血制備電針血清。將體外培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞分為三組，正常組加入正常大鼠血清，對照組加入正常大鼠血清和小膠質(zhì)細(xì)胞激活劑LPS(1μg/ml)，電針組加入電針大鼠血清和LPS(1μg/ml)，通過免疫組化、MTT和Griess法分別觀測8h、12h、24h和48h不同時間小膠質(zhì)形態(tài)、活性及NO釋放量。 結(jié)論： 電針血清可能通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化以及釋放NO，從而保護少突膠質(zhì)細(xì)胞。 通過上述實驗本文得

7、出如下結(jié)論： 1．應(yīng)用F3/RA/β-ME能夠誘導(dǎo)CD90(+)hBMSCs分化為04(+)OLLCs，F(xiàn)3通過激活F3/Notch信號系統(tǒng)促使OLLCs分化成熟。 2．玻璃體腔移植F3誘導(dǎo)的OLLCs能夠使移植細(xì)胞形態(tài)進一步成熟，并形成單層髓 鞘包繞軸突。 3．GBE能夠提高plp<'tg/->小鼠的存活率，改善動物臨床癥狀。 4．GBE可能通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活減少CD4+T細(xì)胞的炎癥性浸潤，