氟比洛芬酯對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、短暫或永久的局部腦血流減少可導(dǎo)致腦組織缺血性損害。腦缺血疾病因其高達(dá)30％的死亡率，是人類死亡和致殘的首要原因。然目前尚缺乏有效的防治方法，中風(fēng)病人的預(yù)后效果較差。為了探索新的腦保護(hù)措施，更多的科學(xué)家聚焦于腦缺血損傷的病理生理機(jī)制研究。
　　近來發(fā)現(xiàn)腦缺血后較長時間內(nèi)損傷仍進(jìn)行性發(fā)展，在延遲性腦損傷中起關(guān)鍵作用的是“缺血后炎癥反應(yīng)”。表現(xiàn)為缺血區(qū)域血管內(nèi)炎性細(xì)胞聚集、粘附，血腦屏障（BBB）破壞，炎性細(xì)胞跨BBB遷移，組織中淋巴細(xì)

2、胞、中性粒細(xì)胞浸潤，進(jìn)而觸發(fā)大量促炎因子瀑布狀釋放，化學(xué)增活素和粘附分子高表達(dá)，造成局部炎癥反應(yīng)。
　　“減輕腦缺血后延遲性損傷”即“抑制腦缺血后炎性反應(yīng)”已成為新近腦保護(hù)研究的熱點，炎癥相關(guān)的酶類[如:誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和環(huán)氧合酶(COX)]在腦缺血后延遲性損傷中起重要作用,故近年COX或COX-2抑制劑的腦保護(hù)作用備受關(guān)注。雖已有研究證實特異性抑制COX-2具有明顯的神經(jīng)保護(hù)效果,然而在臨床使用COX-2抑制劑過程

3、中,由于其破壞了前列環(huán)素(PGI2)和血栓素A2(TXA2)的平衡,導(dǎo)致某些嚴(yán)重副作用的發(fā)生，使其應(yīng)用受到限制。人們又將注意力集中于非選擇性COX抑制劑腦保護(hù),因為前者在抗炎的同時維持PGI2和TXA2的平衡。因此，近年COX抑制劑的腦缺血保護(hù)備受關(guān)注。
　　氟比洛芬酯(FA)作為非選擇性COX抑制劑代表藥物之一，廣泛應(yīng)用于臨床炎性疾病及疼痛治療，然而,關(guān)于該藥物的腦缺血后神經(jīng)保護(hù)作用國內(nèi)外未見報道，本研究擬通過大鼠大腦中動脈閉塞

4、(MCAO)模型證實:氟比洛芬酯對腦缺血后的保護(hù)作用,并探討其可能機(jī)制。
　　第一部分，氟比洛芬酯對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用及時間窗
　　實驗一氟比洛芬酯(FA)對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用
　　方法：48只清潔級雄性SD大鼠，隨機(jī)均分為六組(n=8)，即C組為缺血-再灌注組(I/R)；S組(假手術(shù)組)；F1組(I/R+FA5mg/kg)、F2組(I/R+FA10mg/kg)、F3組(I/R+

5、FA20mg/kg)、L組脂微球?qū)φ战M(I/R+Lip)分別在大腦中動脈阻閉(MCAO)120min再灌注即刻經(jīng)尾靜脈給予FA5，10，20mg/kg或脂微球?qū)φ談?ml/kg。再灌注24，48，72h進(jìn)行神經(jīng)缺陷評分(Garcia法)并于72h評分后處死動物，取大腦切片行10g/l2，3，5-氯化三苯四唑(TTC)染色，測量并計算腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果：神經(jīng)缺陷評分:FA各處理組72hNDS，F(xiàn)1組10.0(7-13)，F(xiàn)

6、2組12.0(10-15)，F(xiàn)3組11.5(13-16)明顯高于C組7.0(6-10)(p<0.05)；F1、F2、F3組間24，48，72h神經(jīng)功能評分無差別，L組與C組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。梗死容積百分比：F1組(34.94±3.52)％，F(xiàn)2組(23.52±9.90)％，F(xiàn)3組(25.53±9.46)％明顯小于C組的(47.07±10.36)％(p<0.01)；F2、F3組明顯低于F1組(p<0.05)；L組與C組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。<

7、br>　　實驗二氟比洛芬酯對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用時間窗
　　方法：32只雄性SD大鼠隨機(jī)均分為4組(n=8)，即C組為缺血-再灌注組(I/R)；F6h組，F(xiàn)12h組和F24h組分別在MCAO120min再灌注6h，12h，24h經(jīng)尾靜脈給予FA10mg/kg。再灌注72h進(jìn)行神經(jīng)缺陷評分(Garcia法)完成后處死動物，取大腦切片行10g/lTTC染色，測量并計算腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果：神經(jīng)缺陷評分:

8、F6h組10.5(7-13)，F(xiàn)12h組9.5(7-14)明顯高于C組7.0(6-10)(p<0.05)；F24h組與C組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。梗死容積百分比：F6h組(25.56±10.69)％，F(xiàn)12h組(33.69±14.42)％明顯小于C組的(47.07±10.36)％(p<0.01)；F24h組與C組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　第二部分，氟比洛芬酯對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的機(jī)制研究
　　實驗三PPAR-γ對FA減輕大

9、鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷作用的影響
　　方法：48只雄性SD大鼠隨機(jī)均分為6組(n=8)，即缺血-再灌注組(I/R)；I/R+FA組在MCAO120min，再灌注開始即刻經(jīng)尾靜脈給予FA10mg/kg；I/R+FA+GW9662組在MCAO前30min腹腔給予PPAR-γ的拮抗劑GW96624mg/kg，MCAO120min再灌注開始即刻經(jīng)尾靜脈給予FA10mg/kg；I/R+GW9662組在MCAO前30min腹腔給予PPAR

10、-γ的拮抗劑GW96624mg/kg，大鼠行MCAO120min；I/R+FA+DMSO組在MCAO前30min腹腔給予3％DMSO(GW9662的溶媒)4ml/kg，MCAO120min再灌注開始即刻經(jīng)尾靜脈給予FA10mg/kg；Sham組行除外頸總動脈栓線的MCAO操作。再灌注72h神經(jīng)缺陷評分完成后(Garcia法)處死動物，取大腦切片行10g/lTTC染色，測量并計算腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果：神經(jīng)缺陷評分：I/R與I

11、/R+FA組，I/R+FA+GW9662組，相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；I/R+FA組，I/R+FA+GW9662組與I/R+FA+DMSO組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。梗死容積百分比：I/R組(47.07±3.66)％明顯大于I/R+FA組(23.52±3.50)％，I/R+FA+GW9662組(33.17±2.53)％(p<0.01)；I/R+FA組(23.52±3.50)％明顯小于I/R+FA+GW9662組(3

12、3.17±2.53)％(p<0.05),I/R+FA組與I/R+FA+DMSO組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　實驗四PPAR-γ參與FA減輕大鼠局灶性腦缺血-再灌注后血腦屏障的破壞
　　方法：48只雄性SD大鼠隨機(jī)均分為6組(n=8)，即缺血-再灌注組(I/R)；I/R+FA組MCAO120min，再灌注開始即刻經(jīng)尾靜脈給予FA10mg/kg；I/R+FA+GW9662組在MCAO前30min腹腔給予PPAR-γ的拮抗劑GW966

13、24mg/kg，MCAO120min再灌注開始即刻經(jīng)尾靜脈給予FA10mg/kg；I/R+GW9662組在MCAO前30min腹腔給予PPAR-γ的拮抗劑GW96624mg/kg；I/R+FA+DMSO組在MCAO前30min腹腔給予3％DMSO(GW9662的溶媒)4ml/kg，MCAO120min再灌注開始后即刻經(jīng)尾靜脈給予FA10mg/kg；假手術(shù)組(sham)行除外頸總動脈栓線的MCAO操作。各組動物均在再灌注46h經(jīng)股靜脈給予

14、2％伊文氏藍(lán)(evansblue；EB)4ml/kg；2h后經(jīng)心臟快速灌注0.9％氯化鈉400ml，斷頭分別取腦左右皮層及海馬，稱重后加入50％三氯乙酸，低溫勻漿離心后取上清液加入無水乙醇，分光光度儀檢測其吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出EB含量并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：右側(cè)海馬：I/R組EB含量(95.08±3.67μg/g組織)明顯高于I/R+FA組(36.54±2.10μg/g組織)，I/R+FA+GW9662組(44.03

15、±2.11μg/g組織)，I/R+GW9662組(106.70±3.59μg/g組織)，Sham組(14.74±0.91μg/g組織)(p＜0.000)；I/R+FA組與I/R+FA+GW9662組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。右側(cè)皮層：I/R組EB含量(37.99±2.95μg/g組織)明顯高于I/R+FA組(20.76±2.19μg/g組織)，I/R+FA+GW9662組(29.61±2.00μg/g組織)，Sham組(8

16、.550±0.93μg/g組織)(p＜0.05)；I/R+FA組與I/R+FA+GW9662組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.01)；I/R組與I/R+GW9662組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。左側(cè)皮層和海馬各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　結(jié)論：1.FA對大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷具有保護(hù)作用,呈劑量依賴關(guān)系,存在“封頂現(xiàn)象”，以10mg/kg劑量為最佳；
　　2.FA腦保護(hù)作用時間窗研究結(jié)果顯示：再灌注后12h之