ERK1-2信號通路在賴氨匹林抗乳腺癌中的作用.pdf

1、目的：研究賴氨匹林（Aspisol）對人乳腺癌細胞 MDA-MB-231、MCF-7增殖、凋亡的調控作用，及對MDA-MB-231、MCF-7細胞內ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase)、p-ERK1/2(p-extracellular signal-regulated kinase)蛋白和凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax表達的影響，探討Aspisol體外抗乳腺癌作用的機制。
　　

2、方法：實驗分為對照組、Aspisol（1、5、10 mmol/L）組、PD9805940μmol/L MEK(mitogen-activated protein kinase kinase)抑制劑組、PD9805940μmol/L聯(lián)合Aspisol10 mmol/L組共六組。1、采用免疫細胞化學方法測定MDA-MB-231、MCF-7細胞的環(huán)氧合酶-2（COX-2）的表達。2、通過HE染色觀察各組藥物作用24h對MDA-MB-231、M

3、CF-7細胞形態(tài)的影響；3、四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測細胞生長抑制率；4、流式細胞儀(flow cytometer， FCM)檢測細胞凋亡率；5、MDA-MB-231、MCF-7細胞經各組藥物作用于24 h后，蛋白質印跡(western blotting)法檢測ERK1/2、p-ERK1/2和凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax的表達。
　　結果：1、MCF-7細胞未檢測到COX-2的表達,而MDA-MB-231細胞COX-2呈強表

4、達,COX-2表達于細胞漿中，免疫細胞化學顯色細胞胞漿呈棕黃色。2、HE染色光鏡下見 Aspisol組細胞密度減小，細胞變圓,胞核染色變淺。PD98059聯(lián)合Aspisol組作用效果更明顯。3、MTT結果顯示1、5、10 mmol/L Aspisol可抑制MDA-MB-231、MCF-7細胞的生長,藥物濃度越大,時間越長,抑制作用越明顯,差異有顯著性(P<0.01)。Aspisol10 mmol/L的濃度抑制率最大，在作用于MDA-MB

5、-231細胞72小時后抑制率可達到(80.75±3.14)％，作用于MCF-7細胞72小時后抑制率可達到(69.54±3.26)%，提示MDA-MB-231細胞對Aspisol的抑制作用較MCF-7細胞敏感。PD98059與Aspisol合用抑制效果更明顯，合用組與PD98059和Aspisol單獨組差異有顯著性（P<0.01）。4、Aspisol可誘導MDA-MB-231、MCF-7細胞發(fā)生凋亡。隨著 Aspisol濃度的提高，凋亡率

6、明顯增高，差異有顯著性(P<0.01)。10 mmol/L Aspisol組細胞凋亡率最高,其中MDA-MB-231細胞早期凋亡率達到（15.41±2.14）%，MCF-7細胞早期凋亡率為（11.40±3.56）%。PD98059與 Aspisol合用組的凋亡率高于 PD98059組和 Aspisol組，合用組與 PD98059和Aspisol單獨組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。5、Aspisol對 MDA-MB-231、MCF-7

7、細胞總ERK表達影響不明顯(P>0.05),主要抑制ERK磷酸化,即下調p－ERK表達，且藥物濃度越大,抑制作用越明顯,差異有顯著性(P<0.05)。合用組的p－ERK明顯低于PD98059組和Aspisol組（P<0.05）?？梢夾spisol和PD98059均可降低p-ERK的表達。6、Aspisol可下調MDA-MB-231、MCF-7細胞的Bcl-2蛋白的表達（P<0.05）,上調Bax蛋白的表達（P<0.05），并且藥物濃度越

8、大,作用效果越明顯。PD98059與Aspisol合用效果優(yōu)于單獨使用，合用組與PD98059和Aspisol單獨組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：
　　1、MCF-7細胞COX-2的表達為陰性,而MDA-MB-231細胞COX-2呈強表達；
　　2、Aspisol可誘導乳腺癌細胞MDA-MB-231、MCF-7凋亡，抑制其生長和增殖；
　　3、Aspisol可抑制乳腺癌細胞MDA-MB-231、M